Kas yra tuberkuliozės PCR analizė

Naujasis mikroorganizmų aptikimo metodas, išrado mokslininko Cary Mullis praėjusio amžiaus pabaigoje - PCR analizė. Jis už savo darbus gavo Nobelio premiją. Visiškai šis procesas vadinamas polimerazės grandinine reakcija. Jis susideda iš mikroorganizmo rūšies pateikimo pateiktoje biomedžiagoje, naudojant trumpus DNR fragmentus. Tai leidžia aptikti infekciją ankstyvoje stadijoje ir nedelsiant pradėti gydymą, nesukeliant sunkių simptomų ir komplikacijų.

Kas yra analizė

Diagnostika pagal PCR yra gauti patogeninės DNR segmentus iš biologinės medžiagos ir suderinti juos tinkama grandine. Tai leidžia identifikuoti mikroorganizmą, kuriam priklauso ląstelės.

Procedūra atliekama trimis etapais:

1. Biologinės medžiagos rinkimas.
2. DNR identifikavimas ir derinimas.
3. Infekcijos pripažinimas.

Šis tyrimas reikalauja specialios medicinos įrangos - stiprinimo. Jame įrengta kamera, kurioje tiriama medžiaga sąveikauja su aukšta temperatūra ir cheminiais fermentais. Išvažiavimo metu laboratorijos technikas turi ilgą sukėlėjo DNR grandinę, jei yra žmogaus organizme.

Kaip pasirengti diagnozei

PCR analizė yra sudėtingas genų inžinerijos procesas, kuriam reikalingas tikslumas ir rimtumas iš laboratorinių technikų ir pacientų. Didelį vaidmenį analizės rezultatų teisingumui atlieka pasirengimas procedūrai, ty teisingas medžiagos rinkimas.

Pagrindiniai informacijos apie ligą šaltiniai yra:

Galima naudoti ir kitas parinktis, jei reikia, skysčiai yra analizuojami iš skirtingų organų.

Pacientui yra tam tikrų taisyklių, kurių reikia laikytis prieš procedūrą. Jei yra kraujo tyrimas, prieš surinkimą draudžiama 8 valandas:

• valgyti maistą;
• rūkyti;
• gerti alkoholinius gėrimus;
• imtis vaistų viduje.

Vakare, prieš surenkant skreplius, vaistas yra girtas, kad jis būtų plonas ir palengvintų apvalkalą. Ryte surinkite medžiagą po kruopščios burnos ertmės higienos.

Prieš švirkščiant bet kokį vaistą, šlapimas renkamas į sterilų indą ryte tuščią skrandį, po plovimo.

Jei asmuo vartoja antibiotikus, polimerazės grandinės reakcijos analizę reikia atidėti, kitaip PCR rezultatas nėra patikimas. Skrepis ar kraujas turi būti duodami po dviejų savaičių nuo gydymo pabaigos.

Kaip bakterijų identifikavimo procesas

Trumpai tariant, procesas yra išskirti dalį DNR. Šiuolaikinių genų inžinerijos metodų naudojimas leidžia nustatyti mikroorganizmo tipą. Be to, analizei reikalinga medžiaga turi būti nedidelė.

Techniškai tai yra labai sudėtinga procedūra, tačiau užtrunka mažiau laiko nei klasikiniai bakteriologiniai tyrimai. Patogenai neturi būti izoliuoti nuo biomaterijos, nereikia jų auginti kelias savaites. Pristatymo dieną pacientas jau gali sužinoti savo analizės rezultatus.

Visas PGR procesas vyksta etapais:

1. Darbas vyksta su pagrindine DNR forma, kuri aukštoje temperatūroje, beveik 100 laipsnių, yra padalinta į dvi grandines.
2. Temperatūra mažėja, siūlai yra prijungti prie nukleorūgščių fragmentų - grunto.
3. Pailgėja - molekulinės struktūros sintezė.

Visą sesiją sudaro apie trisdešimt tokių procedūrų, kartojant ciklą kaip grandininę reakciją. Tai būtina norint sukurti ląstelių, kuriose gautos bakterijos tampa atpažįstamos, skaičių.

Tyrimo išvados

PCR (polimerazės grandininė reakcija) rezultato aprašymas suteikia TB gydytojui, jis yra paprastas arba dislokuotas. Pirmuoju atveju aprašyme bus tik informacija apie Koch lazdelių buvimą ar nebuvimą. Jei dekodavimas yra išsamus, iš jo galite sužinoti ligos mastą, jo fokusavimą. Pagal šiuos kriterijus kiekvienu atveju galima nustatyti tinkamiausią tuberkuliozės gydymą.

Grandininės reakcijos polimerazės analizė nesiskiria nuo gyvų ir negyvų ligų sukėlėjų, ir kalbama tik apie jų buvimą. Todėl prasminga praeiti antrą tuberkuliozės testą tik 3-4 savaites po gydytojo nustatyto gydymo.

Jei rezultatas yra teigiamas, užrašoma užrašas „Mycobacterium tuberculosis“. Jei yra neigiamas rezultatas, šalia biologinio bakterijų pavadinimo yra ženklas „nepastebėta“. Analizės gali būti klaidingos. Tai pasitaiko retai - jei pažeidžiamas PCR tyrimų atlikimo būdas arba yra negyvybingų mikroorganizmų. Galutinę išvadą apie ligą gali atlikti tik TB gydytojas.

Metodo pranašumai

Tuberkuliozės PCR diagnostika įgijo populiarumą dėl daugelio priežasčių. Ji turi daug privalumų, įskaitant:

1. Tyrimo tikslumas. Analizuojant technologiją galima identifikuoti bakterijas, net jei jos yra nedideliais kiekiais.
2. Greitas rezultatas. Visas procesas nuo medžiagos surinkimo iki galutinės išvados trunka apie 5 valandas. Palyginti su sėjimu, ji turi laukti iki kelių savaičių.
3. Visiškas saugumas asmeniui, skirtingai nei fluorografija su jos spinduliuote.
4. Naudojama bet kokia skystoji biomaterija. PCR įgyvendinimui plaučių tuberkulioze, skrepliai suteikia tikslią informaciją, tuberkuliozinio meningito atveju imamas mėginys iš nugaros smegenų. Kraujo tyrimas padeda nustatyti vietinius infekcijos židinius.
5. Tiriamas bakterijų jautrumas antibiotikams. Tai leidžia nustatyti tinkamą gydymą.
6. Ankstyva diagnozė. Galite sužinoti apie ligos buvimą prieš prasidedant simptomams.

Be teigiamų aspektų yra ir trūkumų. Pagrindinė yra kaina. PCR analizė nėra pigi, kuri yra susijusi su brangios įrangos naudojimu. Kitas trūkumas yra poreikis laukti, kol bus atliktas pakartotinis tyrimas po tuberkuliozės gydymo. Kartais bandymo rezultatas yra klaidingas. Taip atsitinka dėl bakterijų mutacijos.

Kai reikia PCR

Plaučių tuberkuliozės PCR neturi kontraindikacijų ir yra visiškai saugus. Todėl yra tam tikrų situacijų ir ligų, kai tai yra vienintelė mokslinių tyrimų galimybė.

Tai apima:

• nėštumas;
• kontaktas su tuberkulioziniu pacientu;
• sunkumų nustatant plaučių ligos diagnozę;
• tyrimas prieš operaciją;
• alerginė reakcija;
• ŽIV infekcija;
• jaunuolis.

Jūs galite naudoti PCR metodą kryptimi, kuri yra išduodama phtisiologijoje, taip pat pediatru, gydytoju ar pulmonologu.

Kas gali pakeisti tuberkuliozės PCR diagnozę

Kitų rūšių tyrimai nėra pasenę, bet ir toliau naudojami. Jie naudojami tais atvejais, kai neįmanoma atlikti tuberkuliozės PCR. Be to, šiuolaikinis metodas nėra idealus, kartais jos rodikliai yra apklausiami ir reikalauja pakartotinio patikrinimo.

Šie metodai padeda nustatyti tuberkuliozės buvimą asmenyje:

• tuberkulino diagnozė (Mantoux);
• fluorografija;
• biologinės medžiagos tyrimas florai;
• plaučių rentgeno spinduliuotė.

Šios studijos yra nemokamos ir prieinamos visiems. Tačiau jie turi trūkumų:

• Tuberkuliozės tyrimas sukelia alergiją. Kontraindikuotinas odos ligoms.
• Rentgeno tyrimus lydi spinduliuotė, kuri netaikoma vaikams, imunodeficito ir nėščioms moterims.
• Bakteriologinės analizės užtrunka daug daugiau laiko, rezultatą galima laukti iki mėnesio.

Alternatyvos negarantuoja šimto procentų teisingos išvados. Jie dažniausiai naudojami prevenciniais tikslais. Tuberkuliozės diagnostika pagal PCR suteikia patikimiausią informaciją. Jei įmanoma, geriau jį naudoti.

Tuberkuliozės vaikams ypatumai ir PGR poreikis

Vaikas turi būti ypač apsaugotas nuo ligos - tuberkuliozės infekcija gali sukelti rimtą žalą organizmui, kurio imunitetas dar nėra visiškai suformuotas.

Įvežus Kocho lazdą į vaikų organizmą, ligos raida vyksta per šiuos etapus:

• Paslėpta. Jis trunka iki vienerių metų, nepateikdamas jokių simptomų.
• Apsinuodijimas. Jis veikia bendrą sveikatą. Atsiranda silpnumas, apatija, apetito stoka, mieguistumas ir sumažėjęs veikimas. Nuolat šiek tiek aukštesnė temperatūra.
• Pagrindinė ligos forma. Tuberkuliozė yra lokalizuota ir yra ligos dėmesio centre. Vaikas yra kosulys, dusulys, galvos skausmas, limfmazgių patinimas.
• Tuberkuliarinis bronchoadenitas. Simptomai yra skausmas pečių mentėse, kosulys su skirtingu garso stiprumu, švokštimas.

Paprastai tuberkulinas švirkščiamas siekiant nustatyti infekciją pagal vaiko odą. Jei tokio tipo tyrimas yra kontraindikuotinas, tada PCR tuberkuliozei yra būtina diagnozavimo galimybė. Vaikai paprastai atlieka kraujo tyrimą, bet, jei reikia, surenkama. Mažiausiai įtariant, kad yra tuberkuliozė, atliekami papildomi tyrimai, siekiant užtikrinti teigiamą rezultatą ir nedelsiant pradėti gydymą ankstyvoje stadijoje, užkertant kelią ligos vystymuisi.

Šiuolaikiniai tyrimų metodai visada yra greitesni ir patikimesni. Gaila, kad dėl brangios įrangos atlikti tokius bandymus yra galimybė ne visose medicinos įstaigose ir vietose. Kokį būdą atlikti egzaminą paprastai pasirenka gydytojas, tačiau pacientas turi teisę pasirinkti. Jei turėjote atlikti PCR testą, pasakykite mums apie tai komentaruose. Jei straipsnis naudingas jums, dalinkitės jais socialiniuose tinkluose - galbūt tai padės draugams.

Kas yra PCR tuberkuliozei ir kaip atlikti tyrimą?

PCR tuberkuliozei nustatoma, kai neįmanoma diagnozuoti diagnozės arba neįmanoma atlikti kitų tyrimų. Analizė leidžia identifikuoti „Koch“ lazdą ankstyviausiais etapais ir pradėti gydymą laiku.

Tuberkuliozės PCR aprašymas

PCR diagnostikos indikacijos

PCR tipai tuberkuliozei

Pasirengimas analizei

Kaip yra PCR tuberkuliozei

Apklausos rezultatų aiškinimas

PCR tuberkuliozės vaikams ypatumai

Kiek kainuoja PCR tuberkuliozei?

Komentarai ir apžvalgos

Tuberkuliozės PCR aprašymas

PCR (polimerazės grandininė reakcija) tuberkuliozei yra tiksli analizė, kuri per kelias valandas gali aptikti Koch lazdelę. Diagnostika grindžiama genų inžinerijos metodais. Gydytojai izoliuoja DNR ląstelę, naudodami genų molekulinius tyrimus, kad nustatytų patogenų tipą.

Metodo pranašumai

• leidžia nustatyti patogeną ankstyvosiose stadijose, be matomų simptomų pasireiškimo;
• diagnostika neturi kontraindikacijų ir leidžiama vaikams;
• mokslinius tyrimus galima atlikti atsižvelgiant į minimalų medžiagos kiekį.
• biomedžiagų tyrimų universalumas;
• Tyrimas yra veiksmingas nustatant ligos pasikartojimą.

Metodo trūkumai

Kartu su privalumais PCR tyrimai taip pat turi trūkumų.

Pagrindiniai yra šie:

1. Tyrimas yra ne visur, kur galite pereiti. Kadangi tokios diagnozės įranga yra brangi, ji įrengiama mokamose laboratorijose.
2. PCR tuberkuliozei gali teigiamai reaguoti, jei aptinka negyvas mikobakterijas, pavyzdžiui, po gydymo.
3. Patogenų mutacijos žymiai sumažina PCR metodo efektyvumą, nes DNR srovės nesugeba nuosekliai sintezuoti.
4. Būtinybė kruopščiai pasirinkti biomateriją analizei.

PCR diagnostikos indikacijos

Atsiųskite į apklausą dėl šių nuorodų:

1. Jei buvo bent vienas kontaktas su tuberkulioze sergančiu pacientu ir sunku nustatyti ligą naudojant standartinius tyrimus.
2. Yra situacijų, kai neįmanoma pareikšti asmens rentgeno spinduliams ar kitiems tyrimams. Tokiais atvejais yra daug lengviau pristatyti skreplių.
3. Analizė skiriama būsimos operacijos išvakarėse, kai būtina nustatyti, ar asmuo serga, ar ne.
4. Jei pacientas turi abejotiną Mantoux reakcijos rezultatą.
5. Skirti nėščioms moterims ir vaikams, kad išvengtumėte rentgeno spindulių poveikio.

PCR tipai tuberkuliozei

Biologinės medžiagos pasirinkimas tuberkuliozės patikrinimui turėtų būti skiriamas atskirai.

Dėl tuberkuliozės PCR diagnozės gali būti atliekami tyrimai:

Kraujo tyrimas

Tuberkuliozės kraujo tyrimo savybės:

1. Atlikta tais atvejais, kai kita diagnostika nėra tinkama arba kontraindikuotina. Pvz., Norint nustatyti teisingą diagnozę, turite atlikti daugiau nei vieną rentgeno vaizdą. Pernelyg didelė ekspozicija nėra saugi organizmui, todėl daug lengviau paimti kraują iš paciento.
2. Be to, gydytojas gali duoti kryptį kraujui, kai po fluorografijos gaunami prieštaringi rezultatai.

Seilių analizė

1. Seilių analizė yra mažiau populiari ir informatyvesnė už kitus tyrimus, nes tuberkuliozė nedaro įtakos seilių liaukoms. Todėl daugeliu atvejų rezultatas bus neigiamas.
2. Šiuo metodu siekiama nustatyti plaučių ir ekstrapulmonines formas.
3. Jei reagento veikimo metu mėginio spalva nepasikeičia, tai reiškia, kad nėra patogenų. Tačiau jei kyla įtarimas dėl ligos, atliekamas papildomas analizės kompleksas.

Skreplių analizė

Sputumo analizė yra labiausiai informatyvus tuberkuliozės patogenams aptikti. Mėginiai imami kelis kartus, paprastai pakanka tris kartus. Tai pašalina klaidų galimybę gauti prastos kokybės medžiagą.

Jei žmogus yra užsikrėtęs tuberkulioze, kartu su kosuliu išsisklaidys nedidelis kiekis. Pacientams, sergantiems pažangiomis ligos stadijomis, gleivės išsiskiria su kraujo pleistrais.

Jei pacientui yra įtariama kaulų tuberkuliozė ar nervų sistema, nerekomenduojama tirti skreplių.

Šlapimo analizė

Šlapimo analizė yra vienas iš būdų aptikti ekstrapulmonines ligos formas: inkstų tuberkuliozę ir šlapimo sistemą.

Ligos plaučių formos atveju, bendra šlapimo analizė praktiškai yra neinformatyvi, nes nepastebėta ryškių patologinių pokyčių.

Vaizdo įraše sužinosite, kuris gydytojas daro tuberkuliozės diagnozę. Filmuojamas kanalo tuberkuliu. ru.

Pasirengimas analizei

Kraujo tyrimo metu PCR turėtų būti laikomasi tam tikrų taisyklių, kad gautų patikimą rezultatą:

• Rekomenduojama analizuoti tuščią skrandį;
• tyrimas turėtų būti pašalintas iš alkoholio;
• jums reikia baigti vartoti antibiotikus 15–20 dienų prieš analizę;
• Prieš kraujo surinkimą rekomenduojama nerūkyti valandą.

Taip pat rekomenduojama laikytis kai kurių taisyklių, kai vartojate skreplių tyrimą:

• medžiaga renkama ryte, todėl jie iš anksto šepečiu dantis ir kruopščiai nuplauna burnos ertmę;
• jei skrepliai neveikia gerai, vakare rekomenduojama pasinerti į kvapą arba įkvėpti;
• Prieš 15 dienų reikia nutraukti antibiotikų vartojimą.

Norint gauti patikimą šlapimo analizės rezultatą, pacientui rekomenduojama laikytis šių taisyklių:

• medžiaga turi būti renkama ryte;
• išvakarėse nerekomenduojama valgyti maisto, kuris gali pakeisti skysčio spalvą (burokėliai, mėlyni ir kiti);
• Prieš 15 dienų nutraukite antibiotikų vartojimą.

Kaip yra PCR tuberkuliozei

Medžiagos suvartojimo savybės:

1. Ryte kraujo tyrimas paimtas iš laboratorijos laboratorinių venų.
2. Skrepliavimui ant gleivių būtina būtinai iš gerklų ir, pageidautina, be didelių seilių kiekio. Jos pacientas turi išgręžti į specialų sterilų indą, tada perduoti tyrimui.
3. Gydytojai iš skruostų gleivinės nuskaito specialų įrankį.
4. Šlapimas išsinuomojamas specialiame inde. Paimkite vidurinę rytinės dalies dalį.

Molekulinė genetinė reakcija pagal PGR atliekama naudojant specialų įrenginį, vadinamą stiprintuvu. Ištirti būtinus DNR segmentus, kurie pradeda molekulių sintezę.

Techniką sudaro keturi etapai:

1. Iš pradžių surenkama reikiama biomaterija moksliniams tyrimams (kraujui, skrepliams ir seilėms).
2. Tada mėginys kaitinamas iki 98 laipsnių ir ne ilgiau kaip dvi minutes. Taigi, sunaikinama pirminė DNR genetikos forma ir susidaro dvi grandinės.
3. Toliau atsiranda temperatūros atšildymas arba sumažinimas, dėl kurio gruntas jungiasi prie DNR grandinės.
4. Paskutinis etapas vadinamas pailgėjimu. Tai yra molekulių sintezė, kuri lemia galutinį rezultatą.

Jums reikia išleisti 25-30 tokių ciklų, kad gautumėte tam tikrą virusų DNR kopijų skaičių. Ligos sukėlėjai yra nustatomi pagal juos.

PCR diagnostikos informacijos turinys ir patikimumas yra 100%.

Apklausos rezultatų aiškinimas

Analizės gamybos laikas yra apie 5–6 val.

Diagnostika pagal PCR metodą duoda rezultatų variantus:

1. Nustatyta. Tirtoje medžiagoje buvo aptikta tuberkuliozės medžiagos DNR. Infekcijos tikimybė yra 97%. Tokie pacientai greitai siunčiami į TB gydytoją, kur bus atliekamas gydymas.
2. Nenustatyta. Neigiamas atsakymas rodo, kad nėra priežastinio veiksnio.

Jei rezultatas yra teigiamas, gydytojas atlieka išsamų dekodavimą, kuris nustato ligos stadiją ir fokusą.

Nuotraukų galerija

PCR tuberkuliozės vaikams ypatumai

PCR nustatomas, jei Mantoux testo rezultatas yra neaiškus arba mažiausiai įtariamas infekcija. Procedūros suteikimas vaikams yra saugus.

Tuberkuliozės PCR diagnozė vaikams ir suaugusiems: indikacijos

Pasaulio sveikatos organizacija prieš 20 metų pripažino, kad tuberkuliozės plitimo rodiklis nebuvo kontroliuojamas ir pasiekė epidemijos mastą. Nuo to laiko padėtis nepagerėjo. Kasmet diagnozuojama daugiau nei milijonas ligos atvejų, iš kurių beveik ketvirtadalis yra mirtini. Pastarąjį dešimtmetį vaikų paplitimo dažnis padidėjo, dauguma ligos formų nėra tinkamos gydyti antibiotikais.

Šiandien viena iš visuotinių medicinos užduočių yra tokių diagnostinių metodų kūrimas, kurie leistų nustatyti patologiją iki ryškių klinikinių simptomų atsiradimo. Vienas iš jų yra tuberkuliozės polimerazės grandininė reakcija (PCR), kuri padeda aptikti Koch ligą sukeliančius lazdas kraujyje, skreplėje ir kituose biologiniuose skysčiuose.

Tuberkuliozės diagnostika

Atrankos testai skirti aptikti pacientus, tuberkuliozės nešiotojus ir užkirsti kelią infekcijos plitimui visuomenėje. Vaikams iki 14 metų „Mantoux“ testas yra labai naudojamas. Tai yra imunologinis tyrimas, kuriame tuberkulino dozė švirkščiama po oda - tai sudėtinis kelių rūšių mikobakterijų genetinės medžiagos mišinys. Išryškėjusios reakcijos atsiradimas rodo aktyvų infekcinį procesą.

Prevenciniam tyrimui suaugusiems, naudojant fluorografiją ar rentgeno spindulius. Šie metodai padeda vaizduoti plaučių audinio patologinius pakitimus. Tačiau tai sukelia sunkumų diferencijuojant tuberkuliozę nuo kitos organinės patologijos (piktybiniai ir gerybiniai navikai, uždegiminiai procesai, parazitinės invazijos, profesionalus plaučių pažeidimas).

Siekiant išsiaiškinti patologinio pagrindo struktūrą ir dydį, gali prireikti papildomų instrumentinių tyrimų:

• tikslinė radiografija;
• Kompiuterinė tomografija;
• magnetinio rezonanso vaizdavimas.

Tuberkuliozės diagnozavimo metodai

Esant abejotiniems rezultatams ir skiriant tinkamą gydymą, reikia nustatyti tikslesnius diagnostikos metodus, kurie leistų išskirti patogeną. Mikroskopinis ir bakteriologinis skreplių tyrimas naudojamas ilgai patvirtinti tuberkuliozės plaučių formas.

Pastaraisiais metais dažnesnė yra įvairių organų ir sistemų, ty inkstų, kaulų, žarnyno, odos, mikobakterijų dažnis. Siekiant nustatyti šias tuberkuliozės formas, gali būti naudojami ultragarsiniai tyrimai, šlapimo ir išmatų kultūra, endoskopiniai tyrimai.

PCR diagnostika tuberkuliozei padės patvirtinti Koch lazdelių buvimą kraujyje, taip pat jos jautrumą tam tikriems vaistams. Tai labai efektyvus metodas, pagrįstas bakterijų genetinės medžiagos aptikimu įvairiuose biologiniuose skysčiuose.

Specifiškumas ir nuorodos

Polimerazės grandininė reakcija yra labai jautrus mikrobiologinis diagnostikos metodas, pagrįstas genetinės inžinerijos principais. Siekiant patvirtinti patogeno buvimą biologinėje medžiagoje, pakanka aptikti unikalų nukleino rūgšties fragmentą. PCR tuberkuliozei gali nustatyti bakterijas kraujyje, skreplėje, šlapime.

Šiuo metu sukurta keletas analizės metodų. Populiariausios tarp jų yra šios:

• Realaus laiko PGR;
• mikrofluidinė technologija;
• sekos nustatymas ir pirozės nustatymas.

Realaus laiko PGR

Laboratorijos dažniausiai naudoja realaus laiko polimerazės grandinės reakciją, nes sumažina klaidingų teigiamų rezultatų skaičių ir pati analizės procedūra trunka trumpai.

Atsižvelgiant į didelį paslėptų ligos formų skaičių ir standartinių diagnostikos metodų neveiksmingumą, vis dažniau naudojamas PCR. Šios analizės tikslas rodomas:

• nustatyti įtartinas sritis rentgeno spinduliuose;
• abejotini tuberkulino tyrimo rezultatai;
• neįmanoma atlikti mikroskopinių ir bakteriologinių skreplių analizę sunkioje būklėje sergantiems asmenims;
• atliekant chirurgines intervencijas, kai būtina greitai užtikrinti, kad nėra infekcijos;
• fluorografijos, rentgeno spindulių ar kompiuterinės tomografijos naudojimo (pvz., nėščioms moterims ir žindymo laikotarpiui, esant radiacinės apšvitos atvejams) nepriimtinumas;
• įtariama ekstrapulmoninė tuberkuliozė (rekomenduojama naudoti ne tik kraują, bet ir skreplius).

Tuberkuliozės PCR diagnostika pasireiškė vaikų tyrime dėl papildomos ekspozicijos ir greito rezultatų.

Paruošimo ir analizės procedūra

Speciali pasirengimas kraujo PCR nėra reikalingas. Tačiau, siekiant išvengti kraujo mėginių ėmimo komplikacijų ir norint gauti aukštos kokybės medžiagas, reikėtų laikytis šių bendrųjų taisyklių:

• analizė turėtų būti atliekama ryte ne anksčiau kaip po 2 valandų po pabudimo;
• Ji turėtų apriboti riebalų ir keptų maisto produktų suvartojimą prieš dieną kraujo paėmimui;
• 8-9 val. susilaikyti nuo valgymo, arbatos ir kavos, leidžiama gerti švarų vandenį;
• Nerūkykite mažiausiai 3-4 valandas.

Nuolatinių vaistų (hormonų, antikoaguliantų, priešuždegiminių vaistų, antibiotikų, kraujo skiediklių) atveju apie tai turėtumėte pranešti laboratorijos pagalbininkui.

Pristatydami skreplių, gerai išvalykite dantis ir keletą kartų plaukite burną. Surinkite medžiagą steriliame inde. Siekiant geresnių rezultatų, vakare gali būti vartojamas atsikosėjęs ar mukolitinis agentas.

Pati diagnozė susideda iš kelių etapų.

Tvoros medžiaga. Jis gali būti atliekamas laboratorijoje ir nuotoliniu būdu. Kai kurios medžiagos rūšys, kurias pacientas renka savarankiškai (šlapimas, skrepliai).

Nukleinų rūgščių struktūros naikinimas (DNR ir RNR molekulių denatūravimas). Norėdami tai padaryti, bandomoji medžiaga kaitinama iki 98 laipsnių temperatūros ir laikoma keletą minučių. Kaip rezultatas, dvigubos spiralės išsiskleidžia, susidaro vienos grandinės molekulės.

Nudegimas Pridėjus pradmenį (trumpą nukleorūgšties dalį), temperatūra sumažėja keliais laipsniais, aktyvuojama polimerazė.

Pripažinimas. Temperatūra pasiekiama optimaliu lygiu, fermento aktyvumas pasiekia maksimalų lygį, o antroji grandinė yra užbaigta pagal „Chargaff“ papildomumo taisyklę.

Norėdami užbaigti tyrimą, būtina sintetinti reikiamą DNR molekulių skaičių - apie 50 ciklų aukščiau minėtos reakcijos. Tai trunka apie 2-3 valandas. Teigiamas reakcijos rezultatas ne visada rodo aktyvią ligos stadiją, bet yra mikroorganizmo buvimo organizme indikatorius.

Metodo pranašumai ir trūkumai

Palyginti su kitais mikrobiologiniais metodais, PCR nebereikia ilgai nustatyti Mycobacterium tuberculosis, naudojant PCR, rezultatą galima gauti bandymo dieną.

Kitas privalumas yra aukštas analizės specifiškumas, leidžiantis aptikti patogeno buvimą 90–95% tikslumu beveik bet kurioje biomedžiagoje (kraujas, šlapimas, išmatos, smegenų skystis, skrepis, bronchų paraudimas).

Tačiau yra keletas metodo trūkumų:

• gana didelis klaidingų teigiamų rezultatų procentas (iki 15%), susijęs su negyvų mikroorganizmų aptikimu;
• kai kuriais atvejais galite praleisti ligos faktą, nes Mycobacterium tuberculosis dažnai yra paveikta mutacijų ir genetinių medžiagų pokyčių;
• mažas imunodeficito žmonių tyrimo veiksmingumas;
• didelės mokslinių tyrimų kainos, brangios įrangos ir reagentų poreikis.

Ką galima pakeisti?

Atsižvelgiant į tuberkuliozės infekcijos formų įvairovę, tikslesnę diagnozę ir gydymo pasirinkimą, būtina derinti kelis diagnostinius tyrimus:

Privaloma vaikų analizė yra Mantoux testas. Jei tuberkulino įvedimas (genetinė mikobakterijų medžiaga) pasireiškia ryškia reakcija, galima daryti prielaidą, kad infekcija yra tuberkuliozė.

Rentgeno metodai gali būti naudojami patologiniam fokusavimui vizualizuoti. Diagnozuojant ekstrapulmoninę tuberkuliozę, naudojami endoskopiniai metodai kartu su biopsija:

• bronchoskopija padeda nustatyti gerklų, trachėjos, bronchų pažeidimus;
• kolonoskopija - žarnos;
• cistouretroskopija - šlapimo sistemos organai;
• histeroskopija - moterų lyties organai. Šie metodai nėra konkretūs, siekiant tiksliai diagnozuoti patogeną.

Bendrieji klinikiniai tyrimai padės tiksliau nustatyti kūno būklę. Reikalingas visiškas kraujo kiekis, turintis leukocitų formulę.

Neutrofilų, turinčių sumažintą limfocitų kiekį, skaičiaus padidėjimas ir eritrocitų nusėdimo greičio (ESR) padidėjimas rodo aktyvų bakterijų etiologijos uždegimo procesą. Išbraukti šlapimo sistemos organų pažeidimus, naudojant bendrą šlapimo analizę ir sterilumo kultūrą.

Šiuo metu PCR yra prieinama daugumoje privačių laboratorijų. Tam reikia ne tik aukštos kvalifikacijos specialistų, bet ir brangios įrangos, daug reagentų. Todėl šio metodo naudojimas yra ribotas, nepaisant didelio tikslumo ir specifiškumo.

Tuberkuliozės polimerazės grandinės reakcija (PCR)

Tuberkuliozė yra viena iš pavojingiausių ligų, nuo kurių žmonija kenčia šimtus metų. Nors mokslininkai sugebėjo nustatyti priežastinį vaistą ir išrado antibiotikus, gydymas ne visada sėkmingas. Pagrindinė priežastis yra ilgas latentinės ar latentinės ligos formos, kuri gali trukti kelerius metus. Vėlyva diagnozė žymiai sumažina paciento atsigavimo galimybes ir visą gyvenimą.

Kas yra PCR?

Mycobacterium tuberculosis nustatymui organizme jau daugiau nei šimtą metų buvo sėkmingai panaudotas Mantoux testas. Kiti metodai gerai įrodė: bakteriologinę kultūrą dirbtinėje terpėje, tepimo mikroskopiją, ELISA. Tačiau daugybė komplikacijų ir klaidingų teigiamų rezultatų, taip pat kai kurių metodų trukmė reikalavo naujų technologijų diegimo į diagnostikos metodiką. Didelis proveržis mikrobiologijos srityje buvo PCR analizė tuberkuliozei. Jau keletą dešimtmečių jis buvo veiksmingas ir plačiai naudojamas įvairioms tuberkuliozės formoms diferencijuoti.

Tuberkuliozės arba polimerazės grandinės reakcijos PCR analizė yra bakterijų arba jų fragmentų DNR aptikimo metodas, pagrįstas nukleino rūgšties molekulių padidėjimu, veikiant fermento DNR polimerazei. Pozityviam rezultatui pakanka tik vienos patogeninės DNR molekulės, todėl šis metodas laikomas labai jautriu. OCP diagnozė tuberkulioze yra veiksmingesnė už mikobakterijų sėklą dirbtinėje aplinkoje, nes, skirtingai nuo kultūros metodo, tai leidžia atskirti laukinius ir vakcinos padermes, skiepytas BCG. Taip išvengiama klaidingų teiginių ir diagnozė tampa tikslesnė.

PCR privalumai

PCR diagnostika tuberkuliozei leidžia nustatyti Koch bacilą bet kurioje organizmo biologinėje aplinkoje, nustatant jų kiekybinę sudėtį net pradinėje ligos stadijoje, kai mikobakterijos yra užmigę. Ligos fazės diagnozė leidžia laiku pradėti profilaktinį gydymą, siekiant išvengti plaučių uždegimo židinių vystymosi ir komplikacijų atsiradimo kituose organuose ir sistemose. Be to, PCR tuberkuliozės tyrimas turi keletą privalumų:

• didelis specifiškumas - 90-100%;
• didelis greitis - nuo 4 valandų iki 2 dienų;
• didelis jautrumas, ypač imunodeficito atveju;
• diferencinė diagnostika.

Pagrindinis šio metodo privalumas yra tai, kad vaikų tuberkuliozės CRC diagnozė leidžia atskirti ligos platinamą formą nuo riboto židinio, netgi turint neigiamus kitų tyrimų rezultatus. Diferencialinis tyrimas leidžia pasirinkti tinkamą gydymo režimą ir padidinti gydymo efektyvumą.

Didelis analizės specifiškumas pasiekiamas pašalinant kryžmines reakcijas su kitomis nukleorūgščių molekulėmis, o didelis jautrumas leidžia aptikti mikobakterijas net ir nedideliame surinktos medžiagos kiekyje. PCR metodas tuberkuliozės skrepliams turi didžiausią patikimumą, jo specifiškumas pasiekia 100%, palyginti su kitų biologinių medžiagų tyrimu.

Specialus PCR mechanizmas suteikia daug galimybių aptikti Koch lazdeles pacientams, kurių imuninė sistema yra nepakankama. Pagal analizės metodą reakcija aptinka antigenus, todėl nesvarbu, ar organizmas gamina antikūnus prieš patogeną, ar ne. Taigi pacientams, kuriems yra imuninės sistemos netikslumų, galima diagnozuoti ekstrapulmonines ligos formas ir pažangius atvejus, o tai nėra įmanoma naudojant kitus metodus.

Metodo trūkumai

Nepaisant daugelio pranašumų ir didelio jautrumo, PCR tuberkuliozei gali sukelti klaidingą neigiamą rezultatą. Kadangi diagnozei paimama labai nedidelė dalis biomedžiagų, tai, kad patogenas „slepia“ ląstelėje ar uždegiminiame dėmesyje, nėra atmestas ir nėra paleidžiamas lauke.

Šio metodo jautrumas vaikams yra 25–80%. Pavyzdžiui, atsitiktinių imčių tyrime, kuriame dalyvavo pacientų, kuriems diagnozuota klinikinė diagnozė, grupė, PCR kraujo tyrimas tuberkuliozei davė teigiamą rezultatą tik 50% pacientų. Šiuo atžvilgiu, bandant vaiką dėl patogeninių mikobakterijų, neįmanoma pakeisti vieno diagnostikos metodo į kitą. Siekiant visiškai patikrinti, ar nėra infekcijos, būtina atlikti išsamų tyrimą keliais būdais vienu metu.

Surinkimo procesas

Pagrindinė PCR diagnostikos patikimumo sąlyga yra biologinių skysčių surinkimo analizės taisyklių laikymasis. Užteršta arba netinkamai surinkta medžiaga gali sukelti neteisingus rezultatus. Dažniausiai tai yra skreplių, kraujo ir šlapimo analizė, tačiau gilesniam diferencinės diagnozės nustatymui galite paimti skrandžio, sinovialinio skysčio, smegenų skysčio, bronchų skalavimo skysčio, spermos, prostatos sekrecijos mėginius.

Šlapimo PCR tuberkuliozei imamas ryte po išorinės lyties higienos, šlapinantis į sterilų indą. Procedūros metu svarbu nepaliesti konteinerio vidinių sienų, kad būtų išvengta trečiųjų šalių mikroorganizmų patekimo. Moterys, kurios gyvena reguliariai seksualiniame gyvenime, tikrai turėtų įdėti į tamponą, kad išvengtų trečiosios šalies išleidimo.

Kraujo tyrimas atliekamas ryte ant tuščio skrandžio, o tuberkuliozės skreplių PCR gali būti atliekamas bet kuriuo paros metu su privaloma prieš burnos higiena. Tai būtina norint pašalinti maisto likučius, kurie gali patekti į konteinerį. Išskyrus skreplių, svarbu užkirsti kelią seilių ir gleivių patekimui iš nosies gleivinės į konteinerį, tai gali iškreipti analizės duomenis.

Skrandžio turinio tyrimas ligoninėje atliekamas anksti ryte, o naktį nurijęs skrepis yra skrandyje. Siekiant nustatyti mikobakterijų tuberkuliozę, šis metodas leidžia sėti tris kartus, o tai greičiausiai leidžia atskirti Koch bacillus.

Dekodavimo rezultatai

Kokybinė PCR analizė duoda rezultatų tipą "aptikta" arba "nenustatyta". Jie reiškia teigiamą ir neigiamą nuosprendį. Atsakymas „aptiko“ reiškia, kad infekcinio agento DNR yra mėginyje ir 97% tikimybė, kad organizmas yra užsikrėtęs tuberkulioze. Neigiamas rezultatas rodo, kad Koch nebeliko DNR biologinės medžiagos mėginyje, ir suteikia 97% tikimybę, kad organizme nėra daug mikobakterijų, ir 60%, kad asmuo nėra užsikrėtęs.

Didžiausias tuberkuliozės diagnozavimo specifiškumas yra kraujo tyrimas ir skrepliai. Su teigiamu rezultatu jie rodo kūno infekciją, kuriai reikia skubių gydymo priemonių. Kitų biomedžiagų tyrimai gali rodyti ne ligos eigą, bet tik užsienio bakterijų buvimą. Taip atsitinka, kai žmogus yra ligos nešėjas, bet neužteršia infekcijos į aplinką ir nekenčia sveikų žmonių.

Kiekybinė PCR analizė atliekama rečiau, o gydantis gydytojas sprendžia jo rezultatų dekodavimą. Tyrimo rodikliai naudojami ligos aktyvumui ir kūno sužalojimo laipsniui nustatyti. Remiantis gautais duomenimis, specialistas gali nustatyti gydymo veiksmingumą ir, jei reikia, koreguoti terapinę schemą.

Tuberkuliozė visada buvo ir išlieka viena iš rimčiausių visų žmonijos sveikatos problemų. Šiuolaikiniai diagnostikos metodai gali aptikti ligą ankstyvoje stadijoje, kad būtų pradėtas gydymas laiku. Tuberkulino testas, tepinėlių mikroskopija, bakterijų kultūra dirbtinėse maistinėse terpėse įrodė, kad yra tuberkuliozės laboratorinės diagnostikos srityje. Tačiau ilgas laukimas rezultatų ir padidėjęs klaidingų teigiamų rodmenų dažnis tapo pasenusiais ir išryškino pažangesnes technologijas. PCR analizė yra labai specifinis ir labai veiksmingas tuberkuliozės diagnozavimo metodas. Jo rezultatai yra patikimiausi tarp visų siūlomų laboratorinių metodų Koch lazdelių aptikimui. Tai leidžia ne tik padaryti galutinį sprendimą, bet ir atlikti reikalingą diferencinę diagnozę.

Polimerazės grandinės reakcija tuberkuliozei

PCR analizė tuberkuliozei leidžia nustatyti ligą bet kurioje vystymosi stadijoje su minimaliu mikobakterijų skaičiumi arba net jei patogeno DNR yra žmogaus kūno fragmentai.

Kas yra PCR?

PGR pasirodė palyginti neseniai. 1983 m. Šį metodą sukūrė Amerikos mikrobiologas Carey Mullis, kuriam jis gavo Nobelio premiją. PCR pagrindas yra pakartotinis tam tikro DNR regiono dvigubinimas naudojant fermentus in vitro. Dėl šios priežasties patogeno DNR yra madinga vizualizuoti net ir esant minimaliam kiekiui (buvimo pėdsakams). Tai yra aukso specifiškumo standartas.

Tuberkuliozės PCR (polimerų grandinės procesas) yra diagnostinė procedūra infekcijos nustatymui, naudojant genetinę inžineriją. Šis tyrimo metodas yra naudojamas mikrobiologinėse, virusologinėse ir imunologinėse medicinos laboratorijose, kurių diagnozės atvejai yra abejotini ir praktiškai nepagrįsti.

Kas reikalinga analizei?

Analizei reikalingi 3 komponentai:

• DNR mėginys.
• Nukleotidiniai junginiai.
• Polimerazės fermentas.

Analizė laboratorijai pateikiama gydytojo nurodymu.

Kas yra metodo pagrindas?

Apklausos pradžioje iš biofluido išskiriamas mikrobinis DNR segmentas.

PCR lemia patogeno tipą 2–3 valandas po bandymo. Tačiau tai nereikia izoliuoti nuo biologinės medžiagos arba ilgai augti laboratorijoje. Svarbiausia, kad mėginyje būtų užkrėstos DNR gabalas. Analizuojant tuberkuliozę, sukuriama dirbtinė ribonukleino rūgšties infekcijos sintezė in vitro. Dėl greitos reakcijos po kelių valandų galite gauti patikimą rezultatą.

Diagnostikos etapai

Tuberkuliozės PCR yra paprastas diagnostikos metodas, leidžiantis greitai gauti atsakymą. Siekiant nustatyti tbc, imama užkrėsto žmogaus (kraujo, skreplių, biologinio skysčio) biologinė medžiaga.

Diagnozė atliekama trimis pagrindiniais etapais:

• Po mėginių paėmimo laboratorijoje sunaikinama pirminė DNR forma. Esant 980 laipsnių temperatūrai, 1,5 grandinės yra 1,5 minutės.
• Kitame etape atliekamas anuliavimas, oro temperatūra sumažinama pora padalijimų, DNR yra prijungta prie grunto.
• Paskutinis tyrimo etapas vadinamas pailgėjimu. Tai yra molekulių biosintezė.

Norint nustatyti norimą DNR su infekcijos dalimi, diagnostika gali būti atlikta 20-25 kartus.

Ar reikia atlikti tuberkuliozės PCR?

PCR analizė tuberkuliozei visuomet atliekama, kai tai yra būtina, ji yra įtraukta į paciento tuberkuliozės tyrimo kokybės standartą. Norėdami tai atlikti, jums reikia tik kreiptis į gydytoją. Dažniausiai poliklinikose tuberkuliozei nustatyti naudojami kiti diagnostiniai metodai.

Tai apima:

• Anamnezės apklausa ir rinkimas.
• Medicininė apžiūra.
• Mantoux tuberkulino testas.
• Rentgeno spinduliai arba fluorografija.
• Ultragarsas.
• Mikroskopinė skreplių mėginio diagnozė.

Nepaisant didelio diagnostikos priemonių skaičiaus, kasmet auga užkrėstų infekcijų skaičius. Be to, patologija įgijo kai kuriuos bruožus: proceso sunkumą, mirtinų rezultatų padidėjimą ir patogeno atsparumą narkotikams.

Gydytojai nerekomenduoja atsisakyti kasmetinio patikrinimo ir skiepijimo, nes tai padidina užsikrėtimo riziką. PCR analizė turi daug privalumų, todėl laikoma tikslia ir informatyviausia visų instrumentinių metodų, skirtų aptikti tbc, ir plačiai naudojama šiuolaikinėse klinikose.

Kokia yra metodo vertė?

Polimerų grandinės procesas dažnai naudojamas kartu su papildomais tuberkuliozės infekcijos nustatymo metodais. Metodo vertė yra tokia:

• Trumpas laikymo laikas. Jau po 2-3 valandų po kraujo donorystės galima nustatyti biologinės medžiagos infekcijos buvimą. Tai yra būtina tais atvejais, kai kyla gyvenimo ir mirties klausimas, ir jums reikia nustatyti tikslią chirurginės intervencijos diagnozę.
• Kai kurie diagnostiniai metodai turi savo kontraindikacijas ir ne visada rodo pilną diagnozės vaizdą. Naudojant PCR, patogenas aptinkamas nedelsiant, ir galima atlikti procedūrą visų amžiaus grupių žmonėms.
• Kaip pavyzdį galite užkrėsti bet kokią biologinę medžiagą. Nustatyti ligos plaučių formas, paimama šlapimo ar seilių. Kraujo mėginys padeda nustatyti visas patologijos formas. Stuburo skysčiai reikalingi norint nustatyti tuberkuliozinį meningitą.
• Saugos metodas. Tyrimui reikalinga tik paciento biologinė medžiaga. Todėl tai yra visiškai saugi ir nekenksminga procedūra tiek vaikams, tiek suaugusiems, skirtingai nei fluorografija, kuri daroma nuo 18 metų amžiaus, ir Mantoux, kuris organizme sukelia neigiamas reakcijas.
• Labai jautrus bandymas. Tai leidžia nustatyti patologiją netgi ankstyvosiose vystymosi stadijose, kai virusas dar nepaliko visų kūno ląstelių.
• Efektyvus patologijos pasikartojimo diagnozavimo metodas.
• Naujoviškas būdas identifikuoti Kocho lazdą nuo pirmųjų jo vystymosi dienų. Tai leidžia greitai pradėti teisingą gydymą ir išgelbėti asmenį nuo mirties. Ankstyvosiose vystymosi stadijose patologija gali būti visiškai išgydoma be komplikacijų.

Šis diagnozavimo metodas turi daug privalumų ir yra aktyviai naudojamas įvairiose medicinos įstaigose. Tačiau, nepaisant jo privalumų, PGR taip pat turi neigiamų savybių.

Kokie yra trūkumai?

Polimero grandinės proceso trūkumai apima:

• Didelės procedūros išlaidos.
• Šis metodas netinka tbc gydymui, nes negyvos infekcinės ląstelės gali suteikti klaidingą teigiamą rezultatą.
• Kai DNR ląstelių mutacija gali būti klaidinga.
• Specialistas turi teisingai paimti būtiną biologinę medžiagą, kad nustatytų infekcijos tipą ir vietą, kurioje jis yra.
• Ne visada leidžiama pacientams, sergantiems plaučių liga.

Kas parodo analizę?

Dažniausiai tokia analizė priskiriama:

• • Jei Mantoux rezultatai davė abejotinus duomenis, kraujas paimamas iš tuberkuliozės venų.
  • Pacientas kontaktuoja su infekuotu asmeniu, tačiau medicininė apžiūra nepadėjo nustatyti teisingos diagnozės.

• Veikiant ekstremaliai situacijai, kai reikia kuo greičiau žinoti, ar pacientas yra užsikrėtęs.
• Nėštumo metu, kai kiti diagnostiniai metodai negali suteikti tikslaus rezultato, nekenkiant vaisiui.

Išnagrinėjus visas diagnozavimo ypatybes ir trūkumus, galime daryti išvadą, kad tikslingai diagnozuoti geriausia naudoti keletą diagnostikos metodų. Tai padės užtikrinti, kad organizme yra infekcija ir kokiame progresavimo etape. Tinkamai apibrėžus diagnozę, bus galima pradėti greitą konservatyvų gydymą ir išgelbėti asmenį nuo mirties.

Tuberkuliozės PCR diagnozė

Tuberkuliozė yra specifinė infekcija, jos dėmesys gali būti skiriamas žmogaus audiniams jau daugelį metų, o paskui - keletą mėnesių. Tai yra lėtinė liga, kurios optimalų gydymo režimą sunku pasirinkti. Viena iš priežasčių yra vėlyva diagnozė, kai mikobakterijos, nors ir žmogaus organizme, jau pritaikytos daugeliui vaistų.

Kokie yra modernūs diagnozavimo metodai? PCR diagnostika - kas tai? Kaip atliekamas šis tyrimas? Kokiais atvejais diagnozuojama tuberkuliozė šiuo metodu ir kas yra jo esmė?

Kas yra PCR diagnostika

Tai vienas moderniausių ne tik ligų, bet ir biologinės medžiagos aptikimo būdų. PCR diagnostika buvo sukurta palyginti neseniai. Maždaug prieš 30 metų 1983 m. Amerikietis biochemikas Carey Banks Mullis pasiūlė kompleksinę mikroorganizmų biologinės medžiagos atkūrimo schemą viename trumpame segmente. Dėl savo atradimo mokslininkas buvo apdovanotas aukščiausiu apdovanojimu - Nobelio premija.

Kas tai - infekcijų PCR diagnozė? Polimerazės grandininė reakcija (PCR) yra virusinių ligų aptikimo diagnozė, pagrįsta genų inžinerijos metodais. Jis plačiai naudojamas medicinos mikrobiologijoje, imunologijoje ir virologijoje. Šis metodas yra universalus ir padeda diagnozuoti nedidelį kiekį medžiagos. Infekcija gali būti pažodžiui aptikta pirmąsias infekcijos valandas, ilgai prieš prasidedant pirmiesiems ligos simptomams.

Metodas susideda iš ligonio gaunamos medžiagos pačios ne patogeno, bet genomo fragmentų (DNR dalelių), jo biosintezės, vėliau nustatant, kuri mikroorganizmo klasė gauta genetinė medžiaga priklauso molekulinių genetinių metodų dėka.

Nepaisant to, kad tai sudėtingas procesas, užtrunka daug mažiau laiko nei daugelis biologinių infekcinių medžiagų aptikimo metodų. Vos per kelias valandas mikroorganizmas gali būti aptiktas pagal PGR. Norėdami tai padaryti, nereikia to atskirti nuo aplinkos (kraujo, smegenų skysčio, skreplių) ir ilgai auginti dirbtinėse maistinėse terpėse. Pakanka, kad tiriamojoje medžiagoje būtų nedidelis infekcinio agento DNR grandinės fragmentas.

Reakcijos pagrindas yra galimybė dirbtinėmis sąlygomis (in vitro) sukurti infekcinio agento nukleino rūgšties molekulių sintezę.

Kas reikalinga PCR?

1. Gruntai yra DNR segmentai, nuo kurių prasideda biosintezė arba kūrimas.
2. Nukleotidai arba kompleksiniai junginiai, kurie yra DNR arba RNR molekulės pagrindas.
3. Polimerazės grandinės reakcija neįmanoma be polimerazės, kuri yra fermentas, pagreitinantis PGR.

PCR diagnostikos etapai

Kaip molekulinė diagnostika atliekama pagal PCR? Procedūra yra paprasta ir trunka trumpai, atsižvelgiant į medžiagos rinkimą.

1. Prieš pradedant tyrimą, jie paima reikiamą biologinę medžiagą - tai bronchų plovimo vanduo, kraujas, skrandžio turinys, skrepliai. Biologinės medžiagos tipas priklauso nuo įtariamo patogeno.
2. DNR pirminės struktūros, susidedančios iš dviejų grandinių, denatūravimas arba naikinimas. Šio etapo esmė yra dviejų grandinių atskyrimas esant aukštai temperatūrai (didžiausia yra 98 ° C, kuri trunka ne ilgiau kaip dvi minutes).
3. Kitame PCR etape, vadinamame anuliavimu, temperatūra sumažinama keliais laipsniais, kad gruntas susietų su DNR grandine.
4. Pailgėjimas, kurio metu tiesiogiai vyksta norimų molekulių sintezė.

Todėl tik 25–30 tokių ciklų gauna reikiamą mikroorganizmų DNR kopijų, kurias lengva atpažinti, skaičių.

Ar PCR reikia diagnozuoti tuberkuliozę?

Visiškai įtariami tuberkuliozės žmonės negali atlikti PGR, nes metodas reikalauja brangios įrangos. Ne visos viešosios klinikos gali leisti jį įsigyti. Be to, taip atsitiko, kad dažniausiai infekcijos diagnozavimo metodai daugeliu atvejų taip pat pateisina save.

Tai apima:

• pacientų apklausa, istorija;
• pilnas asmens tyrimas;
• tyrimas, naudojant Mantoux tuberkulino testą;
• radiografija arba fluorografija;
• kompiuterio diagnostika, jei reikia;
• mikrobiologinių tyrimų metodai: tepinėlių mikroskopija ir skreplių bakteriologinis tyrimas.

Tuberkuliozės PCR atliekamas ypatingais atvejais, kai sunku diagnozuoti ar neįmanoma atlikti kitų instrumentinių metodų.

Nepaisant diagnostinių metodų gausos, tuberkuliozės paplitimas ir toliau auga. Šiuo metu ne tik auga, bet ir kitos savybės:

• liga dažnai būna sunki;
• mirtinų atvejų skaičius didėja;
• vis labiau atsparūs šiuolaikinei chemoterapijai yra diagnozuotos ligos formos.

Žmonių nenoras kasmet atlikti įprastą medicininę apžiūrą, vakcinacijos atmetimas sukelia tuberkuliozės plitimą. Tokiomis sąlygomis mums reikia greitų, informatyvių ir efektyvių tyrimų metodų, kurie turėtų būti prieinami vaikams ir suaugusiems. Visi aukščiau nurodyti diagnostikos metodai yra daug mažesni už PCR.

Tuberkuliozės diagnozavimo nauda PGR

Šie tyrimai, nors ir nauji, gerai įrodė, ypač prieštaringais atvejais, kai dėl įvairių priežasčių neįmanoma diagnozuoti.

PCR dėka daug lengviau aptikti tuberkuliozės sukėlėjus tiriamojoje medžiagoje.

PCR diagnostikos privalumai yra tokie.

1. Tai greita analizė. Nedidelis DNR molekulės fragmentas gali būti naudojamas diagnozuoti vos per kelias valandas (apie penkias), kuris sėkmingai naudojamas avarinėse situacijose, kai, pavyzdžiui, prieš operaciją būtina nustatyti, ar asmuo serga tuberkulioze.
2. PCR analizė leidžiama tais atvejais, kai kiti metodai yra nepasiekiami arba draudžiami (plaučių tuberkuliozės nustatymui, kartais turite atlikti kelis radiografinius vaizdus, ​​kurie bus didelė spinduliuotės dozė).
3. Naudojant PCR, tiriama bet kokia biologinė aplinka patogeno buvimui joje. Pavyzdžiui, galite atlikti smegenų skysčio tyrimą, jei yra įtarimas dėl tuberkuliozės meningito.
4. Leistina vaikų infekcinių ligų PCR diagnozė, nes šis metodas yra saugus.
5. Leidžia identifikuoti patogeną bet kuriame ligos etape.
6. Didelis PCR jautrumas leidžia nustatyti Mycobacterium tuberculosis, net jei biologinėje medžiagoje yra tik keletas mikroorganizmų.
7. Gerai atlikti ligos pasikartojimo diagnozę.

Po visų skaitymo PCR atrodo beveik tobulas diagnostikos metodas, kuris visiems turėtų įtarti tuberkuliozę. Tačiau čia taip pat yra trūkumų, į kuriuos reikia atsižvelgti.

PCR trūkumai diagnozuojant tuberkuliozę

Mūsų metu tokia diagnostika yra retesnė nei įprastumas. Ir tai yra priežastis.

1. Tai brangus tyrimo metodas. Daugelyje klinikų PCR įrangos nėra dėl didelių kaštų, tačiau analizę vis dar galima atlikti mokamose laboratorijose.
2. Iškart po gydymo žmogaus organizme vis dar gali būti negyvų mikobakterijų arba mažų kiekių gyventi (rezultatas bus teigiamas PCR diagnostikos metu), todėl šiuo metu šis metodas bus nepatikimas, todėl nėra prasmės jį atlikti.
3. Mikobakterijų mutacijos sukelia neveiksmingą PGR - negalima sintezuoti normalios DNR grandinės sekos.
4. Būtina pasirinkti tinkamą aplinką tyrimui, kraujas imamas tik tuo atveju, jei įtariama, kad jis yra užsikrėtęs (sepsis), nėra reikalo imtis skreplių, jei kyla klausimas dėl nervų sistemos organų tuberkuliozės. Šiuo atveju PCR negalės aptikti patogeno ir diagnozė bus neinformatyvi.

Indikacijos tuberkuliozės aptikimui naudojant PCR analizę

Tuberkuliozės PCR diagnozė dažniausiai atliekama prieštaringais atvejais. Kada gydytojai perduoda šį tyrimą?

1. Jei sunku diagnozuoti naudojant įprastus turimus metodus, tačiau buvo kontaktas su tuberkulioze sergančiu pacientu.
2. Tuo atveju, kai asmuo negali būti pristatytas į kliniką, kad jis galėtų atlikti įprastinius įprastinius tuberkuliozės tyrimus, lengviau jį ištirti naudojant PCR, nes bandymo skreplius galima pristatyti į stiklainį ir diagnozė patvirtinama per kelias valandas.
3. Jei asmuo ketina imtis skubios pagalbos, ir skubiai reikia išsiaiškinti, ar jis serga tuberkulioze.
4. Jei reikia, nėščia moteris taip pat geriau ištirti tuberkuliozę, naudodama PGR, nes šis metodas yra saugus.
5. Užmokestį visiems, kuriems nebuvo diagnozuota tuberkuliozė, patvirtinta naudojant bakteriologinius metodus ir fluoroskopiją. Taip atsitinka, kai plaučiuose esantis pažeidimas tiesioginiame vaizde yra nepastebimas, o asmuo, atliekant skreplių tyrimą, negalėjo laikytis teisingos medžiagos surinkimo rekomendacijų. Šiuo atveju žmogus nerimauja dėl visų simptomų, būdingų plaučių tuberkuliozei.
6. Kai kyla abejonių dėl Mantoux testo rezultatų.
7. Pageidautina, kad vaikams būtų atlikta tuberkuliozės PCR diagnozė. Procedūra yra saugi, nesukuria papildomos spinduliuotės poveikio ir veiksmingai aptinka sunku diagnozuoti ligos formas.

Laiku diagnozuoti tuberkuliozę yra raktas į tinkamą gydymą ir mažinant ligos plitimą. Dažnai pažįstami ligos nustatymo metodai ne visada veiksmingi. Todėl šiandien PCR yra vienas patikimiausių ir saugiausių būdų aptikti infekciją ankstyvosiose jo vystymosi stadijose.