Tuberkuliozės polimerazės grandinės reakcija (PCR)

Tuberkuliozė yra viena iš pavojingiausių ligų, nuo kurių žmonija kenčia šimtus metų. Nors mokslininkai sugebėjo nustatyti priežastinį vaistą ir išrado antibiotikus, gydymas ne visada sėkmingas. Pagrindinė priežastis yra ilgas latentinės ar latentinės ligos formos, kuri gali trukti kelerius metus. Vėlyva diagnozė žymiai sumažina paciento atsigavimo galimybes ir visą gyvenimą.

Kas yra PCR?

Mycobacterium tuberculosis nustatymui organizme jau daugiau nei šimtą metų buvo sėkmingai panaudotas Mantoux testas. Kiti metodai gerai įrodė: bakteriologinę kultūrą dirbtinėje terpėje, tepimo mikroskopiją, ELISA. Tačiau daugybė komplikacijų ir klaidingų teigiamų rezultatų, taip pat kai kurių metodų trukmė reikalavo naujų technologijų diegimo į diagnostikos metodiką. Didelis proveržis mikrobiologijos srityje buvo PCR analizė tuberkuliozei. Jau keletą dešimtmečių jis buvo veiksmingas ir plačiai naudojamas įvairioms tuberkuliozės formoms diferencijuoti.

Tuberkuliozės arba polimerazės grandinės reakcijos PCR analizė yra bakterijų arba jų fragmentų DNR aptikimo metodas, pagrįstas nukleino rūgšties molekulių padidėjimu, veikiant fermento DNR polimerazei. Pozityviam rezultatui pakanka tik vienos patogeninės DNR molekulės, todėl šis metodas laikomas labai jautriu. OCP diagnozė tuberkulioze yra veiksmingesnė už mikobakterijų sėklą dirbtinėje aplinkoje, nes, skirtingai nuo kultūros metodo, tai leidžia atskirti laukinius ir vakcinos padermes, skiepytas BCG. Taip išvengiama klaidingų teiginių ir diagnozė tampa tikslesnė.

PCR privalumai

PCR diagnostika tuberkuliozei leidžia nustatyti Koch bacilą bet kurioje organizmo biologinėje aplinkoje, nustatant jų kiekybinę sudėtį net pradinėje ligos stadijoje, kai mikobakterijos yra užmigę. Ligos fazės diagnozė leidžia laiku pradėti profilaktinį gydymą, siekiant išvengti plaučių uždegimo židinių vystymosi ir komplikacijų atsiradimo kituose organuose ir sistemose. Be to, PCR tuberkuliozės tyrimas turi keletą privalumų:

• didelis specifiškumas - 90-100%;
• didelis greitis - nuo 4 valandų iki 2 dienų;
• didelis jautrumas, ypač imunodeficito atveju;
• diferencinė diagnostika.

Pagrindinis šio metodo privalumas yra tai, kad vaikų tuberkuliozės CRC diagnozė leidžia atskirti ligos platinamą formą nuo riboto židinio, netgi turint neigiamus kitų tyrimų rezultatus. Diferencialinis tyrimas leidžia pasirinkti tinkamą gydymo režimą ir padidinti gydymo efektyvumą.

Didelis analizės specifiškumas pasiekiamas pašalinant kryžmines reakcijas su kitomis nukleorūgščių molekulėmis, o didelis jautrumas leidžia aptikti mikobakterijas net ir nedideliame surinktos medžiagos kiekyje. PCR metodas tuberkuliozės skrepliams turi didžiausią patikimumą, jo specifiškumas pasiekia 100%, palyginti su kitų biologinių medžiagų tyrimu.

Specialus PCR mechanizmas suteikia daug galimybių aptikti Koch lazdeles pacientams, kurių imuninė sistema yra nepakankama. Pagal analizės metodą reakcija aptinka antigenus, todėl nesvarbu, ar organizmas gamina antikūnus prieš patogeną, ar ne. Taigi pacientams, kuriems yra imuninės sistemos netikslumų, galima diagnozuoti ekstrapulmonines ligos formas ir pažangius atvejus, o tai nėra įmanoma naudojant kitus metodus.

Metodo trūkumai

Nepaisant daugelio pranašumų ir didelio jautrumo, PCR tuberkuliozei gali sukelti klaidingą neigiamą rezultatą. Kadangi diagnozei paimama labai nedidelė dalis biomedžiagų, tai, kad patogenas „slepia“ ląstelėje ar uždegiminiame dėmesyje, nėra atmestas ir nėra paleidžiamas lauke.

Šio metodo jautrumas vaikams yra 25–80%. Pavyzdžiui, atsitiktinių imčių tyrime, kuriame dalyvavo pacientų, kuriems diagnozuota klinikinė diagnozė, grupė, PCR kraujo tyrimas tuberkuliozei davė teigiamą rezultatą tik 50% pacientų. Šiuo atžvilgiu, bandant vaiką dėl patogeninių mikobakterijų, neįmanoma pakeisti vieno diagnostikos metodo į kitą. Siekiant visiškai patikrinti, ar nėra infekcijos, būtina atlikti išsamų tyrimą keliais būdais vienu metu.

Surinkimo procesas

Pagrindinė PCR diagnostikos patikimumo sąlyga yra biologinių skysčių surinkimo analizės taisyklių laikymasis. Užteršta arba netinkamai surinkta medžiaga gali sukelti neteisingus rezultatus. Dažniausiai tai yra skreplių, kraujo ir šlapimo analizė, tačiau gilesniam diferencinės diagnozės nustatymui galite paimti skrandžio, sinovialinio skysčio, smegenų skysčio, bronchų skalavimo skysčio, spermos, prostatos sekrecijos mėginius.

Šlapimo PCR tuberkuliozei imamas ryte po išorinės lyties higienos, šlapinantis į sterilų indą. Procedūros metu svarbu nepaliesti konteinerio vidinių sienų, kad būtų išvengta trečiųjų šalių mikroorganizmų patekimo. Moterys, kurios gyvena reguliariai seksualiniame gyvenime, tikrai turėtų įdėti į tamponą, kad išvengtų trečiosios šalies išleidimo.

Kraujo tyrimas atliekamas ryte ant tuščio skrandžio, o tuberkuliozės skreplių PCR gali būti atliekamas bet kuriuo paros metu su privaloma prieš burnos higiena. Tai būtina norint pašalinti maisto likučius, kurie gali patekti į konteinerį. Išskyrus skreplių, svarbu užkirsti kelią seilių ir gleivių patekimui iš nosies gleivinės į konteinerį, tai gali iškreipti analizės duomenis.

Skrandžio turinio tyrimas ligoninėje atliekamas anksti ryte, o naktį nurijęs skrepis yra skrandyje. Siekiant nustatyti mikobakterijų tuberkuliozę, šis metodas leidžia sėti tris kartus, o tai greičiausiai leidžia atskirti Koch bacillus.

Dekodavimo rezultatai

Kokybinė PCR analizė duoda rezultatų tipą "aptikta" arba "nenustatyta". Jie reiškia teigiamą ir neigiamą nuosprendį. Atsakymas „aptiko“ reiškia, kad infekcinio agento DNR yra mėginyje ir 97% tikimybė, kad organizmas yra užsikrėtęs tuberkulioze. Neigiamas rezultatas rodo, kad Koch nebeliko DNR biologinės medžiagos mėginyje, ir suteikia 97% tikimybę, kad organizme nėra daug mikobakterijų, ir 60%, kad asmuo nėra užsikrėtęs.

Didžiausias tuberkuliozės diagnozavimo specifiškumas yra kraujo tyrimas ir skrepliai. Su teigiamu rezultatu jie rodo kūno infekciją, kuriai reikia skubių gydymo priemonių. Kitų biomedžiagų tyrimai gali rodyti ne ligos eigą, bet tik užsienio bakterijų buvimą. Taip atsitinka, kai žmogus yra ligos nešėjas, bet neužteršia infekcijos į aplinką ir nekenčia sveikų žmonių.

Kiekybinė PCR analizė atliekama rečiau, o gydantis gydytojas sprendžia jo rezultatų dekodavimą. Tyrimo rodikliai naudojami ligos aktyvumui ir kūno sužalojimo laipsniui nustatyti. Remiantis gautais duomenimis, specialistas gali nustatyti gydymo veiksmingumą ir, jei reikia, koreguoti terapinę schemą.

Tuberkuliozė visada buvo ir išlieka viena iš rimčiausių visų žmonijos sveikatos problemų. Šiuolaikiniai diagnostikos metodai gali aptikti ligą ankstyvoje stadijoje, kad būtų pradėtas gydymas laiku. Tuberkulino testas, tepinėlių mikroskopija, bakterijų kultūra dirbtinėse maistinėse terpėse įrodė, kad yra tuberkuliozės laboratorinės diagnostikos srityje. Tačiau ilgas laukimas rezultatų ir padidėjęs klaidingų teigiamų rodmenų dažnis tapo pasenusiais ir išryškino pažangesnes technologijas. PCR analizė yra labai specifinis ir labai veiksmingas tuberkuliozės diagnozavimo metodas. Jo rezultatai yra patikimiausi tarp visų siūlomų laboratorinių metodų Koch lazdelių aptikimui. Tai leidžia ne tik padaryti galutinį sprendimą, bet ir atlikti reikalingą diferencinę diagnozę.

Tuberkuliozės PCR diagnozė vaikams ir suaugusiems: indikacijos

Pasaulio sveikatos organizacija prieš 20 metų pripažino, kad tuberkuliozės plitimo rodiklis nebuvo kontroliuojamas ir pasiekė epidemijos mastą. Nuo to laiko padėtis nepagerėjo. Kasmet diagnozuojama daugiau nei milijonas ligos atvejų, iš kurių beveik ketvirtadalis yra mirtini. Pastarąjį dešimtmetį vaikų paplitimo dažnis padidėjo, dauguma ligos formų nėra tinkamos gydyti antibiotikais.

Šiandien viena iš visuotinių medicinos užduočių yra tokių diagnostinių metodų kūrimas, kurie leistų nustatyti patologiją iki ryškių klinikinių simptomų atsiradimo. Vienas iš jų yra tuberkuliozės polimerazės grandininė reakcija (PCR), kuri padeda aptikti Koch ligą sukeliančius lazdas kraujyje, skreplėje ir kituose biologiniuose skysčiuose.

Tuberkuliozės diagnostika

Atrankos testai skirti aptikti pacientus, tuberkuliozės nešiotojus ir užkirsti kelią infekcijos plitimui visuomenėje. Vaikams iki 14 metų „Mantoux“ testas yra labai naudojamas. Tai yra imunologinis tyrimas, kuriame tuberkulino dozė švirkščiama po oda - tai sudėtinis kelių rūšių mikobakterijų genetinės medžiagos mišinys. Išryškėjusios reakcijos atsiradimas rodo aktyvų infekcinį procesą.

Prevenciniam tyrimui suaugusiems, naudojant fluorografiją ar rentgeno spindulius. Šie metodai padeda vaizduoti plaučių audinio patologinius pakitimus. Tačiau tai sukelia sunkumų diferencijuojant tuberkuliozę nuo kitos organinės patologijos (piktybiniai ir gerybiniai navikai, uždegiminiai procesai, parazitinės invazijos, profesionalus plaučių pažeidimas).

Siekiant išsiaiškinti patologinio pagrindo struktūrą ir dydį, gali prireikti papildomų instrumentinių tyrimų:

• tikslinė radiografija;
• Kompiuterinė tomografija;
• magnetinio rezonanso vaizdavimas.

Tuberkuliozės diagnozavimo metodai

Esant abejotiniems rezultatams ir skiriant tinkamą gydymą, reikia nustatyti tikslesnius diagnostikos metodus, kurie leistų išskirti patogeną. Mikroskopinis ir bakteriologinis skreplių tyrimas naudojamas ilgai patvirtinti tuberkuliozės plaučių formas.

Pastaraisiais metais dažnesnė yra įvairių organų ir sistemų, ty inkstų, kaulų, žarnyno, odos, mikobakterijų dažnis. Siekiant nustatyti šias tuberkuliozės formas, gali būti naudojami ultragarsiniai tyrimai, šlapimo ir išmatų kultūra, endoskopiniai tyrimai.

PCR diagnostika tuberkuliozei padės patvirtinti Koch lazdelių buvimą kraujyje, taip pat jos jautrumą tam tikriems vaistams. Tai labai efektyvus metodas, pagrįstas bakterijų genetinės medžiagos aptikimu įvairiuose biologiniuose skysčiuose.

Specifiškumas ir nuorodos

Polimerazės grandininė reakcija yra labai jautrus mikrobiologinis diagnostikos metodas, pagrįstas genetinės inžinerijos principais. Siekiant patvirtinti patogeno buvimą biologinėje medžiagoje, pakanka aptikti unikalų nukleino rūgšties fragmentą. PCR tuberkuliozei gali nustatyti bakterijas kraujyje, skreplėje, šlapime.

Šiuo metu sukurta keletas analizės metodų. Populiariausios tarp jų yra šios:

• Realaus laiko PGR;
• mikrofluidinė technologija;
• sekos nustatymas ir pirozės nustatymas.

Realaus laiko PGR

Laboratorijos dažniausiai naudoja realaus laiko polimerazės grandinės reakciją, nes sumažina klaidingų teigiamų rezultatų skaičių ir pati analizės procedūra trunka trumpai.

Atsižvelgiant į didelį paslėptų ligos formų skaičių ir standartinių diagnostikos metodų neveiksmingumą, vis dažniau naudojamas PCR. Šios analizės tikslas rodomas:

• nustatyti įtartinas sritis rentgeno spinduliuose;
• abejotini tuberkulino tyrimo rezultatai;
• neįmanoma atlikti mikroskopinių ir bakteriologinių skreplių analizę sunkioje būklėje sergantiems asmenims;
• atliekant chirurgines intervencijas, kai būtina greitai užtikrinti, kad nėra infekcijos;
• fluorografijos, rentgeno spindulių ar kompiuterinės tomografijos naudojimo (pvz., nėščioms moterims ir žindymo laikotarpiui, esant radiacinės apšvitos atvejams) nepriimtinumas;
• įtariama ekstrapulmoninė tuberkuliozė (rekomenduojama naudoti ne tik kraują, bet ir skreplius).

Tuberkuliozės PCR diagnostika pasireiškė vaikų tyrime dėl papildomos ekspozicijos ir greito rezultatų.

Paruošimo ir analizės procedūra

Speciali pasirengimas kraujo PCR nėra reikalingas. Tačiau, siekiant išvengti kraujo mėginių ėmimo komplikacijų ir norint gauti aukštos kokybės medžiagas, reikėtų laikytis šių bendrųjų taisyklių:

• analizė turėtų būti atliekama ryte ne anksčiau kaip po 2 valandų po pabudimo;
• Ji turėtų apriboti riebalų ir keptų maisto produktų suvartojimą prieš dieną kraujo paėmimui;
• 8-9 val. susilaikyti nuo valgymo, arbatos ir kavos, leidžiama gerti švarų vandenį;
• Nerūkykite mažiausiai 3-4 valandas.

Nuolatinių vaistų (hormonų, antikoaguliantų, priešuždegiminių vaistų, antibiotikų, kraujo skiediklių) atveju apie tai turėtumėte pranešti laboratorijos pagalbininkui.

Pristatydami skreplių, gerai išvalykite dantis ir keletą kartų plaukite burną. Surinkite medžiagą steriliame inde. Siekiant geresnių rezultatų, vakare gali būti vartojamas atsikosėjęs ar mukolitinis agentas.

Pati diagnozė susideda iš kelių etapų.

Tvoros medžiaga. Jis gali būti atliekamas laboratorijoje ir nuotoliniu būdu. Kai kurios medžiagos rūšys, kurias pacientas renka savarankiškai (šlapimas, skrepliai).

Nukleinų rūgščių struktūros naikinimas (DNR ir RNR molekulių denatūravimas). Norėdami tai padaryti, bandomoji medžiaga kaitinama iki 98 laipsnių temperatūros ir laikoma keletą minučių. Kaip rezultatas, dvigubos spiralės išsiskleidžia, susidaro vienos grandinės molekulės.

Nudegimas Pridėjus pradmenį (trumpą nukleorūgšties dalį), temperatūra sumažėja keliais laipsniais, aktyvuojama polimerazė.

Pripažinimas. Temperatūra pasiekiama optimaliu lygiu, fermento aktyvumas pasiekia maksimalų lygį, o antroji grandinė yra užbaigta pagal „Chargaff“ papildomumo taisyklę.

Norėdami užbaigti tyrimą, būtina sintetinti reikiamą DNR molekulių skaičių - apie 50 ciklų aukščiau minėtos reakcijos. Tai trunka apie 2-3 valandas. Teigiamas reakcijos rezultatas ne visada rodo aktyvią ligos stadiją, bet yra mikroorganizmo buvimo organizme indikatorius.

Metodo pranašumai ir trūkumai

Palyginti su kitais mikrobiologiniais metodais, PCR nebereikia ilgai nustatyti Mycobacterium tuberculosis, naudojant PCR, rezultatą galima gauti bandymo dieną.

Kitas privalumas yra aukštas analizės specifiškumas, leidžiantis aptikti patogeno buvimą 90–95% tikslumu beveik bet kurioje biomedžiagoje (kraujas, šlapimas, išmatos, smegenų skystis, skrepis, bronchų paraudimas).

Tačiau yra keletas metodo trūkumų:

• gana didelis klaidingų teigiamų rezultatų procentas (iki 15%), susijęs su negyvų mikroorganizmų aptikimu;
• kai kuriais atvejais galite praleisti ligos faktą, nes Mycobacterium tuberculosis dažnai yra paveikta mutacijų ir genetinių medžiagų pokyčių;
• mažas imunodeficito žmonių tyrimo veiksmingumas;
• didelės mokslinių tyrimų kainos, brangios įrangos ir reagentų poreikis.

Ką galima pakeisti?

Atsižvelgiant į tuberkuliozės infekcijos formų įvairovę, tikslesnę diagnozę ir gydymo pasirinkimą, būtina derinti kelis diagnostinius tyrimus:

Privaloma vaikų analizė yra Mantoux testas. Jei tuberkulino įvedimas (genetinė mikobakterijų medžiaga) pasireiškia ryškia reakcija, galima daryti prielaidą, kad infekcija yra tuberkuliozė.

Rentgeno metodai gali būti naudojami patologiniam fokusavimui vizualizuoti. Diagnozuojant ekstrapulmoninę tuberkuliozę, naudojami endoskopiniai metodai kartu su biopsija:

• bronchoskopija padeda nustatyti gerklų, trachėjos, bronchų pažeidimus;
• kolonoskopija - žarnos;
• cistouretroskopija - šlapimo sistemos organai;
• histeroskopija - moterų lyties organai. Šie metodai nėra konkretūs, siekiant tiksliai diagnozuoti patogeną.

Bendrieji klinikiniai tyrimai padės tiksliau nustatyti kūno būklę. Reikalingas visiškas kraujo kiekis, turintis leukocitų formulę.

Neutrofilų, turinčių sumažintą limfocitų kiekį, skaičiaus padidėjimas ir eritrocitų nusėdimo greičio (ESR) padidėjimas rodo aktyvų bakterijų etiologijos uždegimo procesą. Išbraukti šlapimo sistemos organų pažeidimus, naudojant bendrą šlapimo analizę ir sterilumo kultūrą.

Šiuo metu PCR yra prieinama daugumoje privačių laboratorijų. Tam reikia ne tik aukštos kvalifikacijos specialistų, bet ir brangios įrangos, daug reagentų. Todėl šio metodo naudojimas yra ribotas, nepaisant didelio tikslumo ir specifiškumo.

PCR analizė tuberkuliozės diagnozei

Medicina niekada nenusileidžia, ir iki šiol sveikatos sektoriaus pažanga leidžia diagnozuoti ir išgydyti daugelį anksčiau nepaveiktų negalavimų. Taip pat yra ligų, kurių negalima aptikti vizualiai. Tuberkuliozė visada buvo tarp jų. Tai pavojinga infekcinė liga, kuri paveikia plaučius, sąnarius ir kaulus, ir dažnai lemia mirtį net mūsų laikais. Pagerinti šios ligos diagnostiniai metodai, kurie leidžia aptikti ligą ankstesniais etapais, kai jis yra gydomas. Tarp jų yra ne tik rentgeno ir mantoux testai, bet ir tuberkuliozės PCR.

Tuberkuliozė - kas tai yra

Anksčiau tuberkuliozė buvo vadinama sausąja liga arba phthisis. Tai bakterinė infekcija, kuri dažniausiai veikia plaučius. Jo ekstrapulmoninės formos - kaulų ir sąnarių tuberkuliozė, tuberkulinis meningitas - yra mažiau paplitę ir labiau pažengę. Šios infekcinės ligos priežastis yra mikobakterijos. Tuberkuliozės bacilus taip pat vadinama Kochu lazdele.

TB infekcija yra labai užkrečiama, ji perduodama oru lašeliais, kai kosulys ir čiaudulys pacientą. Vienintelė apsauga nuo šios ligos yra laiku pristatyta vakcina. Jis neapsaugo nuo infekcijos, bet neleidžia bakterijoms patekti į organizmą, kad sukeltų tuberkuliozę.

Tuberkuliozės formos

Liga gali atsirasti tiek atviroje, tiek uždaroje formoje. Skirtumai yra tokie:

• uždaroji tuberkuliozė yra besimptomis. Esant tokioms aplinkybėms, Kocho lazdelė skreplėje yra neįmanoma aptikti, todėl užkrėstas nėra pavojingas aplinkai. Toks ligos eiga paprastai nekelia grėsmės net labiausiai užsikrėtusiems, tačiau yra išimčių - viename iš dešimties atvejų uždaroji tuberkuliozė gali virsti atvira forma;
• atviros formos, mikobakterijos, kurios sukelia tuberkuliozę, randamos paciento seilėse ir skreplėje. Užkrėstas organizmas kelia didelį pavojų visuomenei, net ir atskirai. Paprastai liga pirmiausia paveikia plaučius. Jei tai nėra diagnozuota anksti, ji gali būti kitokia forma, pavyzdžiui, kaulų ar sąnarių tuberkuliozė.

Atviroji tuberkuliozės forma diagnozuojama įvairiais būdais. Pacientas atlieka krūtinės ląstos rentgeno arba krūtinės ląstos rentgenogramą, analizuoja jo biologinę medžiagą arba Mantoux odos testą. Pastaruoju metu atsirado kitas metodas, kuris laikomas vienodai efektyviu - polimerazės grandinės reakcijos (PCR) analizė.

Ką reiškia PCR

Medicinos praktikoje šios ligos diagnozavimo metodai ar ligos nustatymas žmogaus DNR ar RNR aptikimo metu jau seniai naudojami. Būtent tai yra tuberkuliozės PCR. Tai yra labai tiksli kraujo ar kito biologinio skysčio analizė, kuri leidžia identifikuoti bakterijas, kurių koncentracija pasirinktoje medžiagoje yra minimali, pakanka vienos kameros. Tyrimas atliekamas naudojant specialų polimerazės fermentą.

Metodo pranašumai

PCR yra diagnostinis metodas, kuris parodė save geriausioje pusėje, todėl jis dažnai naudojamas kartu su kitais metodais ir nepriklausomai. Jo privalumai:

• trumpiausios gamybos sąlygos. Tyrimas atliekamas greitai, maždaug per 5 valandas, naudojant PCR, galima nustatyti tuberkuliozės bacilų buvimą paciento biologiniame skystyje. Tai ypač aktualu, jei reikia nedelsiant atlikti chirurginę intervenciją ir prieš tai gauti tikslią diagnozę;
• Taip atsitinka, kad kiti diagnostiniai metodai pacientui draudžiami. Pavyzdžiui, rentgeno spinduliai negali būti padaryti visiems. Be to, vaizdas ne visada yra įmanoma diagnozuoti, ypač jei liga yra ankstyvoje stadijoje. Naudojant PCR metodą, patogenas aptinkamas nedelsiant;
• Bet kuris paciento biologinis skystis tinka analizei. Plaučių ir ekstrapulmoninių formų nustatymui atliekama tuberkuliozės šlapimo ir seilių PCR. Tyrimas taip pat atliekamas paciento stuburo skysčiu, siekiant nustatyti tuberkulinį meningitą.
• Šis metodas yra visiškai saugus. Norint jį atlikti, pakanka gauti pacientui biologinį skystį. Tuberkuliozės PCR diagnostika vaikams yra patogu ir nekenksminga, nes rentgeno tyrimas leidžiamas tik nuo 18 metų amžiaus, o Mantoux testas kartais sukelia nepageidaujamas reakcijas;
• PCR yra labai jautri analizė. Tai leidžia jums identifikuoti Koch lazdeles su mažiausia mikobakterijų koncentracija;
• Naudojant specialų polimerazės fermentą, bet kuriame etape, nuo ankstyvo iki pažengusio, diagnozuojama liga;
• šis metodas yra veiksmingas diagnozuojant ligos pasikartojimą;
• Šis metodas yra proveržis tiksliai diagnozuojant ankstyvąsias ligos stadijas. Tai leidžia jums pradėti gydymą per trumpiausią įmanomą laiką ir sunaikinti patogenus, kai jie dar neturi negrįžtamo neigiamo poveikio žmogaus kūno organams ir sistemoms.

Kur daryti tuberkuliozės PCR analizę

Nors tuberkuliozės PCR analizė yra labai veiksmingas būdas diagnozuoti šią ligą, jis retai naudojamas atskirai. Paprastai tai yra papildomas tuberkuliozės nustatymo metodas ir jis naudojamas retai. Faktas yra tai, kad šis metodas yra gana brangus.

Viešosios klinikos neturi galimybės įsigyti specialios įrangos PGR analizei atlikti, o vyriausybė nemato šio straipsnio finansavimo taško, nes tuberkuliozę galima diagnozuoti kitais būdais. Toks tyrimas dažniausiai atliekamas privačiose klinikose, kurios gali sau leisti įsigyti reikiamą įrangą.

Metodo trūkumai

Aukšta kaina nėra vienintelis PCR trūkumas. Be didelių išlaidų, šis metodas turi ir kitų trūkumų bei trūkumų, pavyzdžiui:

• PCR tuberkuliozei suteikia teigiamą rezultatą net ir po gydymo, nes jame gyvos bakterijos užima negyvas ląsteles, todėl šis metodas netinka paciento kontroliniam tyrimui, kad patvirtintų jo atsigavimą;
• tuberkuliozės baciliai mutuojasi ir jų DNR yra modifikuotas, o tai gali turėti įtakos rezultato patikimumui;
• PCR kraujo tyrimai tuberkuliozei retai atliekami, nes Koch lazdelių buvimą šiuose biologiniuose skysčiuose yra labai sunku nustatyti. Tai įmanoma tik paskutiniais etapais arba sepsis. Paprastai paciento skreplius imamas diagnozuoti;

Verta pažymėti, kad tiksliausias rezultatas yra tiksliai paciento skrandžio turinio surinkimas. Jei įtariama plaučių tuberkuliozė, skreplių kultūra bus veiksmingiausias būdas diagnozuoti ligą. Jei pacientas turi ekstrapulmoninę formą, šioje biologinėje aplinkoje gali nebūti bakterijų. Norint nustatyti kaulų, sąnarių ir tt tuberkuliozę, naudojant PCR, reikalingas kitas biologinis skystis, pavyzdžiui, stuburo skystis.

Kaip yra PCR tuberkuliozei

Kaip aprašyta anksčiau, PCR analizės esmė yra aptikti patogeno DNR paciento biologiniame skystyje polimerazės reakcijos metu. Pagrindiniai metodo etapai:

1. Biologinės medžiagos mėginių ėmimas. PCR yra ne tik hemotest - tiriama biomasė gali būti seilių, šlapimo, smegenų skysčio, bronchų skysčio, skrandžio turinio, skreplių.
2. Po to biomasė yra veikiama aukštoje temperatūroje, kad būtų sunaikinta DNR struktūra.
3. Tada temperatūra palaipsniui mažėja ir prie sunaikinto DNR elemento prijungiamas gruntas.
4. Remiantis molekulinės sintezės rezultatais, kurie trunka apie 30 ciklų, nustatoma tam tikrų patogeniškų bakterijų padermė arba jos nebuvimas.

Ši analizė reikalauja gero finansavimo, todėl PGR nėra labai dažnai atliekamas. Tačiau šis metodas nėra lygus, kai kitos diagnostikos galimybės yra draudžiamos arba avarijos atveju, kai nėra laiko laukti rezultato.

Apibendrinimas

Apibendrinant galime padaryti šias išvadas:

• PCR yra labai tiksli analizė, kuri po kelių dienų po infekcijos gali aptikti tuberkuliozę;
• ši analizė atliekama per 3,5 - 5 valandas, taigi, kai sąskaita eina į laikrodį, tai yra nepakeičiama;
• tai yra saugus metodas, neturintis šalutinio poveikio;
• Jis naudojamas, kai kiti diagnostiniai metodai parodė nenuoseklius rezultatus arba jų vartojimas yra kontraindikuotinas.

Tačiau PCR retai atliekamas, nes tai yra brangi analizė, kuriai reikalinga speciali įranga. Be to, tai ne visada yra informatyvus, todėl ekspertai naudoja šį tuberkuliozės nustatymo būdą kaip papildomą.

Tuberkuliozės PCR analizė (diagnozė)

Tuberkuliozė arba vartojimas - viena populiariausių 21-ojo amžiaus infekcinių ligų. Jo patogenai yra specialios mikrobakterijos - Koch lazdelės.

Liga plinta ne tik į plaučius, bet ir į smegenis, virškinimą, sąnarius, stuburą, šlapimo sistemą ir odą.

Pasak PSO, kasmet 10 mln. Žmonių kenčia nuo tuberkuliozės, iš kurių 3 milijonai yra mirtini.

Ypač liūdna situacija NVS šalių teritorijoje, čia tuberkuliozės epidemijos vyksta periodiškai. Rusija, Kazachstanas, Ukraina vadovaujasi liūdna šio infekcijos plitimo įvertinimu.

Infekcija yra lengvai perduodama oru lašeliais arba per virškinimo sistemą, veikia gyvybiškai svarbius organus ir taip pat gali greitai prisitaikyti prie polimerinių vaistų ir chemoterapijos.

Vienas iš pagrindinių veiksnių sėkmingam tuberkuliozės gydymui yra savalaikis infekcijos nustatymas.

Diagnostiniai metodai

Žmonija išrado daug būdų, kaip atpažinti pavojingą ligą. Tuberkuliozės diagnozė suskirstyta į instrumentinę ir laboratorinę.

Pirmuoju atveju - kraujo tyrimas tuberkuliozei, taip pat skrepliams, šlapimui.

Antroji grupė yra tyrimas, naudojant rentgeno spindulius ir endoskopiją. Savo ruožtu tuberkuliozės diagnozavimo instrumentiniai metodai yra spinduliuotė ir chirurginė.

Spinduliuotės metodų tipai ligai surasti

• Fluorografija yra metodas, skirtas diagnozuoti ligą, žinomą kiekvienam MIS gyventojui. Naudojant rentgeno spindulius, tiriami plaučiai ir limfmazgiai.
• Krūtinės ląstos rentgenograma - panaši į fluorografiją, bet geresnis infekcijos aptikimo metodas. Vaizdas gaunamas išsamiau ir dviem projekcijomis, tačiau ši procedūra yra maždaug šešis kartus brangesnė. Paprastai jis naudojamas po rimtų įtarimų dėl ligos.
• Kompiuterinė tomografija atliekama kaip papildoma diagnozė, taip pat naudojama po geros priežasties užsikrėsti infekcija.

Chirurginiai diagnostikos metodai apima bronchų endoskopiją, taip pat mediastinoskopiją ir torakokoskopiją.

Pirmasis būdas yra ištirti plaučių bronchų medį, naudojant „zondą“ šiame organe. Likusieji du metodai leidžia ištirti plaučių pleuros dalį krūtinės punkcija.

Visi trys metodai yra rimta chirurginė intervencija ir dažniausiai naudojami ligos progresavimo procese.

Laboratoriniai tyrimai apima:

• Tuberkulio bacilų skreplių analizė.
• Mikroskopinis tyrimas.
• Tuberkuliozės PCR diagnozė

Kas yra PCR diagnozė?

Vienas iš pažangiausių infekcijų specialistų laboratorinių diagnostikos metodų vadina polimerazės grandinės reakciją.

Šį metodą sukūrė garsus JAV mokslininkas Carrie Mullis 1983 m., Už kurį laimėjo Nobelio premiją.

PCR analizė yra DNR dalelių išskyrimas iš skreplių, kraujo, smegenų skysčio, išmatų ir kt. biosintezės.

Naudojant kompleksinį molekulinį genetinį tyrimą nustatomas paciento kūno mikrobų pobūdis.

Tokia tuberkuliozės analizė atliekama keliais etapais:

• Pirma, imami biologiniai mėginiai. Medžiagos dedamos į specialius konteinerius ir siunčiamos į laboratoriją.
• Mokslinių tyrimų centre analizės yra šildomos iki 97 laipsnių. Tai leidžia sunaikinti mikroorganizmų DNR genomo struktūrą, kurią sudaro kelios grandinės.
• Temperatūra yra specialiai sumažinta taip, kad pradmenys (DNR dalyviai, iš kurių prasideda biosintezės procesas) gali prisijungti prie bet kokios deoksiribonukleino rūgšties grandinės.
• Po to atliekama detektavimui reikalingų molekulių biosintezė.

Po 25–30 pakartotinių ciklų laboratorinių tyrimų procese gydytojai turi galimybę suprasti, ar infekciniai mikroorganizmai yra paciento organizme, ar ne.

Privalumai ir trūkumai

Tuberkuliozės PCR yra moderniausia diagnostikos technika. Šis metodas leidžia aptikti infekciją bet kuriame aukšto patikimumo etape. Privalumai:

• Greitis - tyrimas trunka ne ilgiau kaip penkias valandas. Tuberkuliozės mikrobų tyrimo rezultatus galima rasti per 24 valandas.
• Saugumo - PCR metodas neturi amžiaus kontraindikacijų.
• Savalaikiškumas - šis metodas leidžia jums aptikti tuberkuliozę tose stadijose, kai liga nėra simptomų.
• Didelis tikslumo laipsnis - jei analizėse yra tik keli mikroorganizmai, jie bus rasti naudojant polimerazės grandinės reakciją. Be to, šis metodas leidžia lengvai nustatyti tuberkuliozės sukėlėją.
• Universalumas - diagnostika naudojama ne tik vartojimui aptikti, bet ir kitoms ligoms, tokioms kaip chlamidija, gonorėja ir kt.

Nepaisant daugelio privalumų, šios technikos naudojimas vidaus medicinos praktikoje yra išimtis, o ne taisyklė. Tam yra keletas priežasčių.

Šio metodo trūkumai yra šie:

• Didelės apklausos išlaidos.
• Šis metodas netinka tiems, kuriems buvo atliktas gydymas, nes mirusių Koch bakterijų buvimas gali lemti klaidingą teigiamą rezultatą.
• Infekcinių mikroorganizmų mutacijos atveju jų genomas negali būti atpažįstamas klaidingai.
• Svarbu pasirinkti tinkamą aptikimo aplinką. Pavyzdžiui, tuberkuliozės PCR kraujo tyrimo rezultatas (skiedimo įrašas) bus neigiamas, jei nervų sistema bus užsikrėtusi.
• Ne visada įmanoma taikyti šį metodą pacientams, kuriems diagnozuotas plaučių pažeidimas.

Be to, tokia tuberkuliozės analizė reikalauja modernios įrangos, kurios 90 proc. Ligoninių neturi. MIS tokią analizę gali atlikti „Invitro“ klinikų tinklas.

Analizės sąlygos

Rekomendacijos pacientams, kuriems atliekamas toks tuberkuliozės tyrimas, skiriasi priklausomai nuo analizės tipo.

Vartojant kraujo už PCR, prieš valandą reikia nustoti rūkyti, o du - nustoti vartoti alkoholinius gėrimus ir riebaus maisto produktus.

Taip pat rekomenduojama susilaikyti nuo fizinio krūvio, taip pat neįmanoma išgerti kraujo už tuberkuliozę tuščiame skrandyje.

Vartojant tamponą iš burnos ir nosies ertmės, jūs negalite valgyti 2-4 valandas prieš procedūrą, kitaip jis nebus informatyvus. Be to, negerkite alkoholio.

Tikslus skaitymas yra draudžiamas rūkyti anksčiau nei prieš valandą. Išvakarėse, susilaikyti nuo dantų valymo ir purškiklių bei burnos purškiklių.

Jei įtariate urogenitalinės sistemos tuberkuliozę, pacientas 2-3 dienas iki pristatymo turėtų išskirti lytį, 2-3 valandas iki procedūros nedarykite „tualeto“. Lyties organai turėtų būti plaunami paprastu vandeniu be specialių priemonių.

Moterims patariama nenaudoti makšties tablečių, žvakių, rutulių ir taip pat susilaikyti nuo bandymų kritinėmis dienomis.

Likus 5 dienoms iki pristatymo, reikia atsisakyti kolposkopijos ir transvagininio ultragarso procedūros,

Kada naudojama PCR diagnostika?

Ne kiekvienoje klinikoje yra tokia sudėtinga diagnozė, tačiau gydytojai vis dažniau naudojasi tokiais tyrimo metodais. Paprastai tokia analizė atliekama ypatingomis situacijomis.

• Jei kyla abejonių dėl manta, gali būti naudojamas tuberkuliozės kraujo tyrimas.
• Tais atvejais, kai pacientas kontaktuoja su infekuotu asmeniu, tačiau gydantis gydytojas negali tiksliai nustatyti diagnozės.
• Neatidėliotinos operacijos atveju, kai reikia per trumpą laiką sužinoti, ar pacientas turi šią infekciją.
• Kai pacientas yra nėščia, kai kiti tyrimo metodai nėra pakankamai saugūs naujagimiui.

Pažymėtina, kad ši diagnozė rekomenduojama vaikams dėl jo saugumo.

Jei studentas turi kontraindikacijų prieš tuberkulino testą, jis gali atlikti kraujo tyrimą tuberkuliozei vietoj mantijos pagal PCR.

Tuberkuliozės PCR analizė

Tuberkuliozės PCR analizė yra populiariausia tarp medicininių tyrimų šios ligos srityje.

Bet kaip įspėti save ir savo artimuosius nuo šios baisios ligos? Kaip atlikti būtinus PCR testus?

Tuberkuliozės simptomai ir jų prevencija

Ekspertai teigia, kad apie 30 proc. Visų gyventojų kenčia nuo tuberkuliozės.

Didžiausia ligos dalis išsivysčiusiose šalyse. Tai dažniausiai pasitaiko dėl sumažėjusio imuniteto žmonėms.

Liga yra viena seniausių. Šią ligą galima rasti smegenų gleivinėje, virškinamajame trakte, sąnariuose ir stubure, šlapimo sistemoje ir mažose žmogaus odos vietose.

Ekspertai lengvai nustato paveiktą odą. Svetainėje yra mažų plombų, kurios laikui bėgant didėja, išsisklaido baltu skysčiu.

Tuberkuliozės sukėlėjas dažniausiai gali būti renkamas kalbant su sergančiu asmeniu, kai jie kosulys ar čiaudulys. Paprastai liga progresuoja be simptomų arba turi atvirą formą, tačiau tuberkuliozės PCR diagnozė leidžia ją aptikti ankstyvaisiais ir avariniais atvejais.

Ligos simptomai: ilgalaikis drėgnas kosulys, karščiavimas, šaltkrėtis, per didelis prakaitavimas naktį, staigus svorio sumažėjimas, nuovargio jausmas ir silpnumas.

Atviriausia ligos forma yra pavojingiausia. Asmuo, kenčiantis nuo tuberkuliozės, gali užkrėsti sveikus žmones.

Pagrindinis plaučių ligos simptomas yra hemoptysis. Jis pasireiškia bet kokia ligos forma.

Kai kuriais atvejais tai gali sukelti kraujavimą iš žmogaus plaučių. Tai labai pavojinga ir reikalauja skubios medicininės pagalbos.

Tuberkuliozės prevencijai ir pripažinimui ekspertai nustato: mėginį - tuberkulino testą, biologinės medžiagos tyrimą, fluorografiją, rentgeno spindulius ir kraujo tyrimą, skreplių ar seilių tyrimą.

Ligos diagnozė

Geresnė ligos diagnozė - tai teisinga ir gydymo pradžioje. Daugeliu atvejų įprastiniai patogenų aptikimo metodai ne visada veikia ir jau yra pasenę.

Svarbiausias būdas nustatyti ir diagnozuoti plaučių ligą yra medicininės apžiūros testai. Paprastai naudokite PCR diagnostiką. Šį tyrimą neseniai 1983 m. Atrado Amerikos biochemikas Mullis.

Bandymas plaučių tuberkulioze sergančiam pacientui atliekamas tik ypatingais atvejais, kai sunku nustatyti diagnozę arba neįmanoma aptikti ligos instrumentiniu būdu.

Polimerazės grandinės reakcija yra patikimas PGR metodas. Ši analizė leidžia nustatyti priežastinį veiksnį, kiek jis yra kraujo, šlapimo ir nugaros smegenų skysčiuose. Toks medicininis patikrinimas yra saugiausias.

PCR analizė suteikia 100% rezultatą.

Jis turi didelį jautrumą, kuris padeda atpažinti ligą pirmą kartą po infekcijos, prieš pasireiškiant ligos simptomams. Šis analizės metodas duoda rezultatus per kelias valandas po biologinės medžiagos pristatymo. Šios analizės sėjimas atliekamas tris kartus, tačiau ligos skrandžio aspiracija atliekama tik ligoninėje.

Buvo nustatyti trys kriterijai, siekiant nustatyti rezultatus: didelis tikslumas, jautrumas iki 90%, specifiškumas.

PCR bandymas naudojamas kai kuriais atvejais:

1. diagnozuoti plaučių tuberkuliozę;
2. nustatyti ligos šaltinį;
3. ekstrapulmoninės lokalizacijos apibrėžimas;
4. pasikartojimo diagnozė.

Įvertinkite rezultatą ir nurodykite tinkamą gydymą, gali tik specialistas. Labai svarbu, kad tuberkuliozės nustatymui būtų suteikta tinkama medicininio gydymo schema, būtina atlikti patogeno jautrumo anti-tuberkuliozės prietaisams bandymą.

Įvairūs tuberkuliozės medicininiai tyrimai

Jūs galite atlikti būtiną analizę dviem būdais: iš žmogaus paimkite kraują ar seilę arba išgerkite skreplių.

Kraujo tyrimai pagal PCR gali būti dviejų tipų: ELISA ir PCR. Toks tyrimas padeda stebėti gydymo veiksmingumą.

ELISA padeda rasti antikūnus žmogaus organizme, kurie priešinasi tuberkuliozės mikrobams. Šis tyrimas atliekamas kartą per dieną. Pagrindinis trūkumas yra jo mažas jautrumas, kuris leidžia nustatyti tik nedidelės infekcijos lygį.

Populiariausi ir efektyviausi tyrimai yra mycobacterium tuberculosis analizė. Su juo gydytojai gali lengvai rasti žmogaus kraujo bakterijų DNR. Šis metodas taip pat naudojamas nustatyti bakterijų skaičių, kontroliuoti paciento gydymą, siekiant nustatyti ankstyvą pasikartojimą.

PCR seilė yra vienas iš pažangiausių tyrimų metodų. Tokia analizė padės nustatyti infekcines bakterijas seilėse. Naudojant PCR padidėja kenksmingų mikrobų DNR fragmentų skaičius.

Kultūros metodas skirtas žmogaus skreplių tyrimui, siekiant nustatyti mikrobakterijas.

Pasiruošimas PCR tyrimui

Dėmesio, jums reikia tinkamai paruošti seilių PCR. Jei nesilaikoma visų nurodymų, analizė gali būti klaidinga.

Prieš pradedant tyrimą, draudžiama rūkyti, vartoti maistą ir vaistus, taip pat vartoti alkoholį 12 valandų. Draudžiama valyti dantis, negalima naudoti skalavimo priemonės, burnos gaiviklio ir dantų siūlių.

Draudžiama naudoti lūpų dažus ir patekti į intymius santykius. Leista plauti burną paprastu virintu vandeniu;

Šis tyrimas padės nustatyti: herpes, chlamidijas, tuberkuliozę, pneumonijos patogenus, onkovirusus, barolleozę, mononukleozę, ŽIV, visų rūšių hepatitą, raudonukę.

Mykobakterijų analizė daugiausia atliekama prieštaringai vertinamais atvejais, ty, jei sunku diagnozuoti ar prieš pradedant operaciją buvo aptikta tuberkuliozės paciento liga. Naudojamas nėščiosioms tirti, nes šis metodas yra saugiausias motinai ir vaisiui.

Kartais analizė atliekama privačioje klinikoje, nes pacientas nesilaikė testavimo taisyklių, tačiau tuo pačiu metu nerimauja dėl visų simptomų. Analizė gali būti atliekama, kai po Mantoux testo specialistai nėra įsitikinę, ar pacientas yra vaikas.

Medicininių bandymų pranašumai ir trūkumai tuberkuliozės nustatymui

PCR yra populiariausias ir efektyviausias būdas nustatyti ligą.

Didžiausias skirtumas nuo kitų studijų yra greitas ir tikslus rezultatas.

Šio medicininio patikrinimo privalumas yra tas, kad jį galima atlikti urologiniams, ginekologiniams, onkologiniams, infekciniams, hematologiniams, plaučių, gastroenterologiniams ir kitiems tyrimams.

Pagrindinis tokio medicininio tyrimo privalumas yra tas, kad kraujo tyrimai, skrepliai ir seilės yra pasirengę per trumpą laiką (liga užtruks 5 valandas). Toks medicininis patikrinimas leidžia atlikti bandymus, kai tam tikri ligos tyrimo metodai yra draudžiami arba nepasiekiami. Puikiai aptinkamas pasikartojimas žmonėms.

Dėl šios analizės tapo įmanoma atlikti bet kurios biologinės aplinkos tyrimus. Leidžiama paimti medžiagą iš vaikų. PCR leidžia nustatyti ligos sukėlėjus bet kuriame ligos etape. Dėl savo didelio jautrumo galima rasti mikrobų, net jei yra tik keletas bakterijų.

PCR metodas plečia savo galimybes. Jis taip pat naudojamas nustatyti tėvystę, naujų genų gamybą, mutacijas, DNR elementų pervažiavimą ir pan.

Šio tyrimo trūkumai yra brangus tyrimo metodas.

Po gydymo, atlikus medicininę apžiūrą, kraujo tyrimas gali įrodyti, kad nedideli kiekiai yra gyvi ar negyvi patogenai, ir tai bus teigiamas rezultatas.

Bakterijos ir mikrobai gali patirti mutaciją, po to PCR negalės juos identifikuoti ir identifikuoti, todėl tik specialistas gali nustatyti reikalingos aplinkos tyrimą, kitaip toks medicininis patikrinimas bus neveiksmingas.

Po bandymo yra neigiamas rezultatas, tačiau tai neužkerta kelio užsikrėsti tuberkulioze. Toks medicininis patikrinimas atliekamas pacientams, sergantiems sunkia plaučių liga, kai kiti tyrimai nepateikia tikslių rezultatų. PCR bus naudinga žmonėms, sergantiems plaučių ir ekstrapulmonine tuberkulioze.

Deja, medicinos įranga tuberkuliozės patogenams aptikti yra labai brangi.

Viešosios ligoninės ir klinikos to negali sau leisti, tačiau mokamos klinikos atlieka paciento testus ir per trumpą laiką pateikia paruoštus rezultatus.

Tuberkuliozės PCR diagnozė

Tuberkuliozė yra specifinė infekcija, jos dėmesys gali būti skiriamas žmogaus audiniams jau daugelį metų, o paskui - keletą mėnesių. Tai yra lėtinė liga, kurios optimalų gydymo režimą sunku pasirinkti. Viena iš priežasčių yra vėlyva diagnozė, kai mikobakterijos, nors ir žmogaus organizme, jau pritaikytos daugeliui vaistų.

Kokie yra modernūs diagnozavimo metodai? PCR diagnostika - kas tai? Kaip atliekamas šis tyrimas? Kokiais atvejais diagnozuojama tuberkuliozė šiuo metodu ir kas yra jo esmė?

Kas yra PCR diagnostika

Tai vienas moderniausių ne tik ligų, bet ir biologinės medžiagos aptikimo būdų. PCR diagnostika buvo sukurta palyginti neseniai. Maždaug prieš 30 metų 1983 m. Amerikietis biochemikas Carey Banks Mullis pasiūlė kompleksinę mikroorganizmų biologinės medžiagos atkūrimo schemą viename trumpame segmente. Dėl savo atradimo mokslininkas buvo apdovanotas aukščiausiu apdovanojimu - Nobelio premija.

Kas tai - infekcijų PCR diagnozė? Polimerazės grandininė reakcija (PCR) yra virusinių ligų aptikimo diagnozė, pagrįsta genų inžinerijos metodais. Jis plačiai naudojamas medicinos mikrobiologijoje, imunologijoje ir virologijoje. Šis metodas yra universalus ir padeda diagnozuoti nedidelį kiekį medžiagos. Infekcija gali būti pažodžiui aptikta pirmąsias infekcijos valandas, ilgai prieš prasidedant pirmiesiems ligos simptomams.

Metodas susideda iš ligonio gaunamos medžiagos pačios ne patogeno, bet genomo fragmentų (DNR dalelių), jo biosintezės, vėliau nustatant, kuri mikroorganizmo klasė gauta genetinė medžiaga priklauso molekulinių genetinių metodų dėka.

Nepaisant to, kad tai sudėtingas procesas, užtrunka daug mažiau laiko nei daugelis biologinių infekcinių medžiagų aptikimo metodų. Vos per kelias valandas mikroorganizmas gali būti aptiktas pagal PGR. Norėdami tai padaryti, nereikia to atskirti nuo aplinkos (kraujo, smegenų skysčio, skreplių) ir ilgai auginti dirbtinėse maistinėse terpėse. Pakanka, kad tiriamojoje medžiagoje būtų nedidelis infekcinio agento DNR grandinės fragmentas.

Reakcijos pagrindas yra galimybė dirbtinėmis sąlygomis (in vitro) sukurti infekcinio agento nukleino rūgšties molekulių sintezę.

Kas reikalinga PCR?

1. Gruntai yra DNR segmentai, nuo kurių prasideda biosintezė arba kūrimas.
2. Nukleotidai arba kompleksiniai junginiai, kurie yra DNR arba RNR molekulės pagrindas.
3. Polimerazės grandinės reakcija neįmanoma be polimerazės, kuri yra fermentas, pagreitinantis PGR.

PCR diagnostikos etapai

Kaip molekulinė diagnostika atliekama pagal PCR? Procedūra yra paprasta ir trunka trumpai, atsižvelgiant į medžiagos rinkimą.

1. Prieš pradedant tyrimą, jie paima reikiamą biologinę medžiagą - tai bronchų plovimo vanduo, kraujas, skrandžio turinys, skrepliai. Biologinės medžiagos tipas priklauso nuo įtariamo patogeno.
2. DNR pirminės struktūros, susidedančios iš dviejų grandinių, denatūravimas arba naikinimas. Šio etapo esmė yra dviejų grandinių atskyrimas esant aukštai temperatūrai (didžiausia yra 98 ° C, kuri trunka ne ilgiau kaip dvi minutes).
3. Kitame PCR etape, vadinamame anuliavimu, temperatūra sumažinama keliais laipsniais, kad gruntas susietų su DNR grandine.
4. Pailgėjimas, kurio metu tiesiogiai vyksta norimų molekulių sintezė.

Todėl tik 25–30 tokių ciklų gauna reikiamą mikroorganizmų DNR kopijų, kurias lengva atpažinti, skaičių.

Ar PCR reikia diagnozuoti tuberkuliozę?

Visiškai įtariami tuberkuliozės žmonės negali atlikti PGR, nes metodas reikalauja brangios įrangos. Ne visos viešosios klinikos gali leisti jį įsigyti. Be to, taip atsitiko, kad dažniausiai infekcijos diagnozavimo metodai daugeliu atvejų taip pat pateisina save.

Tai apima:

• pacientų apklausa, istorija;
• pilnas asmens tyrimas;
• tyrimas, naudojant Mantoux tuberkulino testą;
• radiografija arba fluorografija;
• kompiuterio diagnostika, jei reikia;
• mikrobiologinių tyrimų metodai: tepinėlių mikroskopija ir skreplių bakteriologinis tyrimas.

Tuberkuliozės PCR atliekamas ypatingais atvejais, kai sunku diagnozuoti ar neįmanoma atlikti kitų instrumentinių metodų.

Nepaisant diagnostinių metodų gausos, tuberkuliozės paplitimas ir toliau auga. Šiuo metu ne tik auga, bet ir kitos savybės:

• liga dažnai būna sunki;
• mirtinų atvejų skaičius didėja;
• vis labiau atsparūs šiuolaikinei chemoterapijai yra diagnozuotos ligos formos.

Žmonių nenoras kasmet atlikti įprastą medicininę apžiūrą, vakcinacijos atmetimas sukelia tuberkuliozės plitimą. Tokiomis sąlygomis mums reikia greitų, informatyvių ir efektyvių tyrimų metodų, kurie turėtų būti prieinami vaikams ir suaugusiems. Visi aukščiau nurodyti diagnostikos metodai yra daug mažesni už PCR.

Tuberkuliozės diagnozavimo nauda PGR

Šie tyrimai, nors ir nauji, gerai įrodė, ypač prieštaringais atvejais, kai dėl įvairių priežasčių neįmanoma diagnozuoti.

PCR dėka daug lengviau aptikti tuberkuliozės sukėlėjus tiriamojoje medžiagoje.

PCR diagnostikos privalumai yra tokie.

1. Tai greita analizė. Nedidelis DNR molekulės fragmentas gali būti naudojamas diagnozuoti vos per kelias valandas (apie penkias), kuris sėkmingai naudojamas avarinėse situacijose, kai, pavyzdžiui, prieš operaciją būtina nustatyti, ar asmuo serga tuberkulioze.
2. PCR analizė leidžiama tais atvejais, kai kiti metodai yra nepasiekiami arba draudžiami (plaučių tuberkuliozės nustatymui, kartais turite atlikti kelis radiografinius vaizdus, ​​kurie bus didelė spinduliuotės dozė).
3. Naudojant PCR, tiriama bet kokia biologinė aplinka patogeno buvimui joje. Pavyzdžiui, galite atlikti smegenų skysčio tyrimą, jei yra įtarimas dėl tuberkuliozės meningito.
4. Leistina vaikų infekcinių ligų PCR diagnozė, nes šis metodas yra saugus.
5. Leidžia identifikuoti patogeną bet kuriame ligos etape.
6. Didelis PCR jautrumas leidžia nustatyti Mycobacterium tuberculosis, net jei biologinėje medžiagoje yra tik keletas mikroorganizmų.
7. Gerai atlikti ligos pasikartojimo diagnozę.

Po visų skaitymo PCR atrodo beveik tobulas diagnostikos metodas, kuris visiems turėtų įtarti tuberkuliozę. Tačiau čia taip pat yra trūkumų, į kuriuos reikia atsižvelgti.

PCR trūkumai diagnozuojant tuberkuliozę

Mūsų metu tokia diagnostika yra retesnė nei įprastumas. Ir tai yra priežastis.

1. Tai brangus tyrimo metodas. Daugelyje klinikų PCR įrangos nėra dėl didelių kaštų, tačiau analizę vis dar galima atlikti mokamose laboratorijose.
2. Iškart po gydymo žmogaus organizme vis dar gali būti negyvų mikobakterijų arba mažų kiekių gyventi (rezultatas bus teigiamas PCR diagnostikos metu), todėl šiuo metu šis metodas bus nepatikimas, todėl nėra prasmės jį atlikti.
3. Mikobakterijų mutacijos sukelia neveiksmingą PGR - negalima sintezuoti normalios DNR grandinės sekos.
4. Būtina pasirinkti tinkamą aplinką tyrimui, kraujas imamas tik tuo atveju, jei įtariama, kad jis yra užsikrėtęs (sepsis), nėra reikalo imtis skreplių, jei kyla klausimas dėl nervų sistemos organų tuberkuliozės. Šiuo atveju PCR negalės aptikti patogeno ir diagnozė bus neinformatyvi.

Indikacijos tuberkuliozės aptikimui naudojant PCR analizę

Tuberkuliozės PCR diagnozė dažniausiai atliekama prieštaringais atvejais. Kada gydytojai perduoda šį tyrimą?

1. Jei sunku diagnozuoti naudojant įprastus turimus metodus, tačiau buvo kontaktas su tuberkulioze sergančiu pacientu.
2. Tuo atveju, kai asmuo negali būti pristatytas į kliniką, kad jis galėtų atlikti įprastinius įprastinius tuberkuliozės tyrimus, lengviau jį ištirti naudojant PCR, nes bandymo skreplius galima pristatyti į stiklainį ir diagnozė patvirtinama per kelias valandas.
3. Jei asmuo ketina imtis skubios pagalbos, ir skubiai reikia išsiaiškinti, ar jis serga tuberkulioze.
4. Jei reikia, nėščia moteris taip pat geriau ištirti tuberkuliozę, naudodama PGR, nes šis metodas yra saugus.
5. Užmokestį visiems, kuriems nebuvo diagnozuota tuberkuliozė, patvirtinta naudojant bakteriologinius metodus ir fluoroskopiją. Taip atsitinka, kai plaučiuose esantis pažeidimas tiesioginiame vaizde yra nepastebimas, o asmuo, atliekant skreplių tyrimą, negalėjo laikytis teisingos medžiagos surinkimo rekomendacijų. Šiuo atveju žmogus nerimauja dėl visų simptomų, būdingų plaučių tuberkuliozei.
6. Kai kyla abejonių dėl Mantoux testo rezultatų.
7. Pageidautina, kad vaikams būtų atlikta tuberkuliozės PCR diagnozė. Procedūra yra saugi, nesukuria papildomos spinduliuotės poveikio ir veiksmingai aptinka sunku diagnozuoti ligos formas.

Laiku diagnozuoti tuberkuliozę yra raktas į tinkamą gydymą ir mažinant ligos plitimą. Dažnai pažįstami ligos nustatymo metodai ne visada veiksmingi. Todėl šiandien PCR yra vienas patikimiausių ir saugiausių būdų aptikti infekciją ankstyvosiose jo vystymosi stadijose.